靶向CAIX的免疫疗法通过下调PD-L1表达实现间接免疫检查点阻断在肾透明细胞癌治疗中的机制研究

推荐：本研究针对肾透明细胞癌(ccRCC)中PD-L1过表达导致的免疫抑制微环境，通过靶向碳酸酐酶IX(CAIX)的单克隆抗体(mAbs)和CAR T细胞疗法，发现CAIX抑制可显著下调PD-L1表达，并揭示PI3K/Akt通路在此调控中的作用。该研究为ccRCC免疫治疗提供了新策略，发表于《European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics》。

　　

在肿瘤免疫治疗领域，肾透明细胞癌(ccRCC)因其高度免疫抑制性微环境而成为临床难题。约24%的ccRCC患者存在程序性死亡配体1(PD-L1)过表达，导致53%的死亡风险增加。尽管免疫检查点抑制剂(ICI)联合酪氨酸激酶抑制剂(TKI)已成为一线方案，但治疗相关毒性和耐药性问题亟待解决。碳酸酐酶IX(CAIX)作为ccRCC的特征性标志物（94-97%病例表达），其与PD-L1的潜在关联为突破治疗瓶颈提供了新思路。

来自圣保罗研究基金会(FAPESP)支持的研究团队在《European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics》发表重要成果。研究人员通过生物信息学分析发现CAIX与PD-L1表达呈显著正相关(r=0.68)，进而采用双抗体克隆(G36和GT12)和CAR T细胞两种免疫治疗策略，系统揭示了CAIX靶向治疗通过PI3K/Akt通路下调PD-L1的创新机制。这项研究不仅为理解肿瘤免疫逃逸提供了新视角，更为开发兼具靶向性和免疫调节功能的联合疗法奠定了理论基础。

关键技术方法包括：1) 基于CCLE数据库的9种ccRCC细胞系RNA-seq生物信息学分析；2) 流式细胞术分选SKRC52细胞亚群及表型追踪；3) 抗CAIX单抗(10-20μg/mL)处理CAIX⁺PD-L1⁺的SKRC52/SKRC59细胞系；4) Western blot检测PI3K/Akt(pT308)通路蛋白；5) 抗CAIX CAR T细胞(含4-1BB共刺激域)治疗NSG小鼠ccRCC原位模型。

研究结果：

3.1 生物信息学分析显示CAIX与PD-L1表达正相关

通过CCLE数据库分析9种ccRCC细胞系，发现CAIX与PD-L1 mRNA水平存在显著正相关(Pearson r=0.68, p=0.042)，提示两者可能存在调控关系。

3.2 CAIX缺失导致PD-L1表达抑制

流式分选SKRC52细胞亚群发现：初始CAIX^-PD-L1⁺群体在培养两周后转变为CAIX^-PD-L1^-，而CAIX⁺群体维持PD-L1原表达状态，证实CAIX缺失可自主下调PD-L1。

3.3 抗CAIX单抗剂量依赖性下调PD-L1

免疫荧光显示：G36单抗(10μg/mL)使SKRC52细胞CAIX表达降低>90%，PD-L1降低>70%；在SKRC59细胞中分别降低60%和80%。流式验证该效应与细胞毒性无关(P>0.05)。

3.4 PI3K/Akt通路参与PD-L1调控

Western blot显示抗CAIX处理显著降低PI3K和Akt(pT308)表达，尤其在VHL突变的SKRC52细胞中更显著，提示该通路在CAIX-PD-L1轴中的核心作用。

3.5 CAR T治疗实现间接免疫检查点阻断

原位模型证实：抗CAIX CAR T细胞使肿瘤PD-L1表达降低50%，CD3⁺T细胞浸润增加，颗粒酶B表达提升，且耗竭标志物(CTLA-4/TIM-3/PD-1/CD39)减少，效果堪比直接抗PD-L1治疗组。

这项研究创新性揭示了CAIX靶向治疗的双重机制：既直接杀伤肿瘤细胞，又通过PI3K/Akt通路下调PD-L1实现间接免疫检查点阻断。特别值得注意的是，VHL基因突变可能通过增强HIF信号放大该效应，这为个性化治疗提供了分子标志物。研究采用的G36单抗因其非蛋白聚糖结合特性，较传统抗体具有更好安全性。从转化医学角度看，该发现不仅适用于ccRCC，也为CAIX高表达的其他实体瘤（如三阴性乳腺癌、胶质母细胞瘤）的联合免疫治疗开辟了新途径。未来研究可进一步探索CAIX抑制剂与现有ICI的协同效应，以及基于CD28共刺激域的优化CAR设计，这些都将推动肿瘤免疫治疗进入精准调控新时代。