靶向CAIX的免疫疗法通过下调PD-L1实现间接免疫检查点阻断：肾透明细胞癌治疗新策略

本研究针对肾透明细胞癌(ccRCC)中PD-L1过表达导致的免疫抑制微环境，通过靶向碳酸酐酶IX(CAIX)的单克隆抗体(mAbs)和CAR T细胞疗法，首次揭示CAIX抑制可下调PD-L1表达，并证实PI3K/Akt通路参与调控。该发现为ccRCC免疫治疗提供了新靶点，相关成果发表于《European Journal of Medicinal Chemistry》。

　　

在肾癌治疗领域，免疫检查点抑制剂虽取得突破，但约24%的肾透明细胞癌(ccRCC)患者因PD-L1过表达面临更高死亡风险。这种跨膜蛋白通过与T细胞表面的PD-1结合，形成"免疫刹车"效应，导致T细胞功能耗竭。更棘手的是，现有PD-1/PD-L1抑制剂常引发免疫相关不良反应，促使科学家寻找更精准的治疗靶点。

值得关注的是，碳酸酐酶IX(CAIX)在94-97%的ccRCC病例中异常高表达，这种膜相关酶能酸化肿瘤微环境，促进肿瘤生存和转移。但鲜为人知的是，CAIX与PD-L1之间可能存在某种神秘关联。为揭开这一谜团，来自圣保罗研究基金会(FAPESP)支持的研究团队开展了一项创新研究，成果发表在《European Journal of Medicinal Chemistry》上。

研究人员采用多学科技术手段：通过流式细胞术和免疫荧光显微镜分析CAIX与PD-L1表达相关性；利用RNA-seq数据开展生物信息学分析；构建CAIX靶向的CAR T细胞进行体内治疗实验；采用Western blot检测PI3K/Akt通路关键蛋白。实验选用两种ccRCC细胞系SKRC52(源自转移灶)和SKRC59(源自原发灶)，后者通过慢病毒转导获得CAIX表达。

研究结果揭示：

1. CAIX与PD-L1表达相关性

   生物信息学分析显示，9种ccRCC细胞系中CAIX与PD-L1 mRNA表达呈显著正相关(r=0.68)。更惊人的是，通过流式分选获得的SKRC52 CAIX-/PD-L1+亚群，培养两周后自发转变为双阴性表型，暗示CAIX缺失可能导致PD-L1下调。

2. 抗体介导的CAIX抑制效应

   使用两种抗CAIX单抗(G36和GT12)处理细胞后，流式和免疫荧光显示：在SKRC52++细胞中，10μg/mL G36使CAIX阳性细胞减少>90%，PD-L1降低>55%；SKRC59++细胞也呈现类似趋势。特别值得注意的是，这种下调并非由细胞死亡引起，因为抗体处理组细胞活力未受显著影响。

3. 分子机制探索

   Western blot显示抗CAIX处理可降低PI3K和Akt(pT308)表达，尤其在SKRC59++细胞中更为显著。这提示CAIX可能通过PI3K/Akt通路调控PD-L1表达，而该通路已知参与PD-L1转录调控和膜 trafficking过程。

4. CAR T细胞的治疗潜力

   在ccRCC原位小鼠模型中，抗CAIX CAR T细胞(含4-1BB共刺激域)使肿瘤重量减少30%，并通过免疫组化证实PD-L1表达下降。更关键的是，治疗组肿瘤中CD3⁺ T细胞浸润和颗粒酶B表达增加，而耗竭标志物(CTLA-4、TIM-3、PD-1、CD39)减少约50%，效果堪比分泌抗PD-L1抗体的阳性对照组。

这项研究首次系统阐明：靶向CAIX的免疫疗法可通过下调PD-L1实现间接免疫检查点阻断，其机制可能涉及PI3K/Akt通路调控。这一发现具有三重意义：

1. 理论层面：揭示了CAIX与PD-L1的新型调控关系，丰富了我们对肿瘤免疫逃逸机制的认识；

2. 技术层面：证实抗CAIX CAR T细胞不仅能直接杀伤肿瘤，还能重塑免疫微环境；

3. 临床层面：为克服现有PD-1/PD-L1抑制剂耐药性问题提供了新思路，尤其对VHL突变导致的ccRCC更具针对性。

未来研究可进一步探索：CAIX调控PD-L1的具体分子机制；不同共刺激域(如CD28 vs 4-1BB)对治疗效果的影响；以及CAIX靶向疗法与其他免疫治疗的协同效应。这项研究为开发"双管齐下"的ccRCC治疗方案奠定了重要基础。