大麻二酚通过抑制MALAT1长链非编码RNA和PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制胰腺癌上皮间质转化的机制研究

本研究揭示了大麻二酚（CBD）在胰腺导管腺癌（PDAC）中的抗转移新机制。通过抑制长链非编码RNA MALAT1的表达，CBD有效阻断了PI3K/Akt/mTOR信号通路的激活，从而逆转上皮-间质转化（EMT）过程。研究首次证实CBD与吉西他滨（Gem）联用可协同下调EMT标志物，为PDAC的联合治疗提供了新策略。

　　

ABSTRACT

胰腺导管腺癌（PDAC）以侵袭性转移和化疗耐药为特征，其恶性进展与上皮-间质转化（EMT）密切相关。研究发现非精神活性大麻素大麻二酚（CBD）能显著抑制PDAC细胞系（MIA PaCa-2、PANC-1和AsPC-1）中CXCR4/CXCR7和基质金属蛋白酶（MMP-2/9）的表达，从而降低细胞迁移和侵袭能力。值得注意的是，CBD通过下调间质标志物（如波形蛋白、纤连蛋白）和恢复上皮标志物（如E-钙黏蛋白），成功逆转了CXCL12诱导的EMT过程。

1 Introduction

PDAC患者五年生存率不足10%，EMT过程是导致其高转移性和化疗耐药的关键因素。CBD作为 Cannabis sativa 的提取物，已在多种癌症中显示出抗炎、促凋亡和抗转移特性。长链非编码RNA MALAT1在PDAC中高表达，可通过激活PI3K/Akt/mTOR通路促进EMT。本研究旨在阐明CBD通过调控MALAT1/PI3K/Akt/mTOR轴抑制PDAC转移的分子机制。

2 Materials and Methods

实验采用三种PDAC细胞系：具有间质特征的PANC-1、上皮表型MiaPaCa-2和高转移性AsPC-1。通过MTT法确定CBD的安全浓度（10 μM），Western blot检测EMT标志物，明胶酶谱法分析MMP活性，Transwell实验评估侵袭能力。采用pCDH-hMALAT1质粒转染实现MALAT1过表达。

3 Results

3.1 CBD下调转移相关蛋白表达

非细胞毒性浓度（10 μM）的CBD剂量依赖性地降低CXCR4/CXCR7和MMP-2/9的表达，明胶酶谱证实其酶活性显著抑制。

3.2 CBD逆转EMT表型

CBD处理使间质标志物（波形蛋白、纤连蛋白、Snail、Twist）下调2-3倍，同时使上皮标志物（Occludin、E-钙黏蛋白）表达恢复。划痕实验显示，CBD完全阻断CXCL12诱导的细胞迁移。

3.3 MALAT1的关键调控作用

qPCR显示CBD使MALAT1表达降低60%-70%。MALAT1过表达可激活PI3K/Akt/mTOR通路并增强侵袭能力，而CBD处理能完全逆转这些效应。Western blot证实CBD使p-PI3K、p-Akt和p-mTOR水平降低50%以上。

3.4 协同治疗潜力

亚毒性浓度的CBD（3 μM）与吉西他滨（1 nM）联用，对MALAT1和EMT标志物的抑制呈现协同效应，联合组侵袭细胞数比单药组减少40%-60%。

4 Discussion

本研究首次揭示CBD通过"MALAT1-PI3K/Akt/mTOR-EMT"轴抑制PDAC转移的分子机制。临床意义在于：

1. 低浓度CBD（3 μM）即可增强吉西他滨疗效，避免毒性叠加

2. MALAT1可作为预测CBD疗效的生物标志物

3. 为克服EMT相关化疗耐药提供新策略

研究局限性包括缺乏体内实验和正常胰腺上皮细胞对照。未来需通过PDX模型验证CBD的临床转化价值，并探索其调控MALAT1的表观遗传机制。