防风草(Saposhnikovia divaricata)盐旱胁迫下内参基因的筛选及其在基因表达分析中的应用

为解决盐旱胁迫下防风草基因表达研究中内参基因选择标准缺失的问题，研究人员通过qRT-PCR技术评估了8个候选内参基因（GAPDH-1/2、EF1A-1/2、18SrRNA-1/2/3和UBQ）的表达稳定性。运用geNorm、NormFinder、BestKeeper算法和RefFinder软件分析发现，GAPDH-2稳定性最佳，18SrRNA-3最差。该研究为防风草逆境响应基因的精准定量提供了重要参考。

在植物逆境生物学研究中，实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术因其高灵敏度成为基因表达检测的金标准。然而要获得可靠数据，关键在于选择稳定的内参基因。这项研究以药用植物防风草(Saposhnikovia divaricata)为材料，系统评估了8个候选内参基因在盐旱胁迫下的表达稳定性。

研究团队采用三重验证策略：通过geNorm算法分析基因表达配对变异，NormFinder评估组内变异，BestKeeper计算相关系数，最后用RefFinder软件进行综合排名。有趣的是，两个看家基因GAPDH的同源异构体表现出显著差异——GAPDH-2稳定性高居榜首，而GAPDH-1却表现平平。核糖体RNA基因18SrRNA-3更是意外垫底，这一发现颠覆了传统认知。

为验证筛选结果，研究人员选取胁迫响应关键因子ABF转录因子进行测试。结果显示，使用不同内参基因会导致ABF表达量计算出现显著偏差，这直接印证了内参基因选择的重要性。该研究不仅建立了防风草逆境研究的标准化方案，其方法论对其它药用植物的基因表达研究也具有重要借鉴意义。