磷酸化α-突触核蛋白(pS129 α-syn)在脑脊液与血浆中的检测价值：一项否定其作为突触核蛋白病标志物的多队列研究

本研究针对α-突触核蛋白(α-syn)丝氨酸129位点磷酸化(pS129)能否作为突触核蛋白病生物标志物的争议问题，开发了超灵敏Simoa检测技术，通过PD/AD/对照人群队列分析发现：pS129 α-syn仅占脑脊液总α-syn的1%，且与α-syn种子扩增试验(synSAA)结果无相关性，证实其不能反映突触核蛋白病理；意外发现AD患者所有α-syn亚型均显著升高，提示其更可能反映突触损伤。该研究为α-syn病理机制研究和生物标志物开发提供了重要转折性证据。

在神经退行性疾病研究领域，α-突触核蛋白(α-synuclein, α-syn)的异常聚集一直是科学家们关注的焦点。这种蛋白在帕金森病(PD)和路易体痴呆(DLB)患者脑中形成的Lewy小体中高度富集，其丝氨酸129位点磷酸化(pS129)修饰更是病理特征的核心标志。然而令人困惑的是，尽管脑组织病理显示pS129 α-syn与疾病密切相关，但多年来关于其在脑脊液(CSF)和血液中检测价值的研究却充满矛盾——有的报告显示其水平升高具有诊断价值，有的则发现与健康人群无差异。这种"组织-体液悖论"成为阻碍突触核蛋白病精准诊断的关键瓶颈。

为解决这一争议，来自意大利佩鲁贾大学医院（University Hospital of Perugia）与比利时ADx NeuroSciences的研究团队开展了一项突破性研究。他们开发出灵敏度达0.125 pg/mL的单分子阵列(Simoa)检测技术，首次系统评估了pS129 α-syn在CSF和血浆中的真实生物学意义。研究纳入了经过严格临床和生物标志物分型的167例样本（包括PD/PDD、AD患者和神经科对照），同时结合α-syn种子扩增试验(synSAA)这一病理金标准进行验证。论文发表在《npj Parkinson's Disease》杂志，其结论或将重塑学界对α-syn体液检测的认知框架。

关键技术方法包括：1) 开发高特异性Simoa检测体系，通过肽段图谱分析验证抗体表位；2) 建立包含PD、AD和对照的多中心队列（含CSF synSAA数据）；3) 平行检测N端、C端α-syn蛋白异构体；4) 分析pS129 α-syn与AD核心生物标志物(Aβ_42/40、p-tau₁₈₁等)的关联性；5) 评估血液污染、冻融循环等前处理因素影响。

抗体特性与检测方法验证

通过合成肽段图谱分析发现，常用pS129抗体（如MJF-R13和D1R1R）的表位分布存在显著差异：MJF-R13识别包含Y¹²⁵的区域，而D1R1R靶向更C端的128-133氨基酸序列。这种差异导致相邻位点（如Y¹³³）的磷酸化会显著干扰检测信号。研究人员最终选择D1R1R作为捕获抗体，建立的Simoa方法可稳定检测低至0.125 pg/mL的pS129 α-syn，且经碱性磷酸酶处理证实其磷酸化特异性。

生物标志物水平与疾病关联

在CSF中，pS129 α-syn浓度仅为N端α-syn的1%和C端α-syn的0.5%，血浆中占比更低至0.002%。

数据显示：PD/PDD患者与对照组的各α-syn亚型均无显著差异；而AD患者所有α-syn形式（包括pS129）均显著升高（p<0.01）。更重要的是，synSAA阳性(S+)与阴性(S-)组间的pS129 α-syn水平完全重叠，证实其与α-syn聚集病理无关。

突触损伤标志物关联

所有CSF α-syn亚型均与突触标志物SNAP-25呈现强相关（r=0.62-0.79），

且AD患者CSF C-α-syn水平与MMSE评分下降速率显著相关（r=0.68）。这些发现共同指向α-syn升高反映的是突触/神经元损伤的共性过程，而非特异性病理聚集。

这项研究通过技术创新和严谨设计，解决了领域内长期存在的关键争议：1) 明确否定pS129 α-syn作为突触核蛋白病体液标志物的价值；2) 揭示α-syn升高与AD病理的强关联性，为理解其在神经退行性变中的角色提供新视角；3) 建立的超灵敏检测方法为后续研究设立新标准。特别值得注意的是，该研究首次将synSAA这一病理金标准引入验证体系，从根本上规避了既往研究依赖临床诊断可能带来的偏差。这些发现不仅节省了未来研究在错误方向上的资源投入，更将推动领域转向探索更具病理特异性的α-syn修饰形式或构象变异体。正如作者强调的，这项研究标志着从"单纯检测α-syn含量"到"解析其病理特异性特征"的重要范式转变。