整合多组学揭示CLL中T细胞调控与耗竭的分子图谱并鉴定galectin-9为免疫治疗新靶点

本研究针对慢性淋巴细胞白血病(CLL)免疫治疗失效的核心问题，通过单细胞RNA测序(scRNA-seq)、质谱流式(CyTOF)和空间成像技术，系统解析了CLL患者淋巴结(LN)中T细胞耗竭(TEX)与调节性T细胞(TREG)的异质性特征。研究发现galectin-9-TIM3互作轴是驱动免疫逃逸的关键通路，动物模型证实其阻断可延缓疾病进展，为改善CLL免疫治疗响应提供了新策略。

　　

慢性淋巴细胞白血病(CLL)作为B细胞恶性肿瘤，长期面临免疫治疗响应率低的困境。尽管CAR-T和PD-1抑制剂在其他血液肿瘤中取得突破，但CLL患者对这些疗法的反应率不足30%。这种治疗抵抗被认为与肿瘤微环境中T细胞功能耗竭密切相关，但具体机制尚未阐明。德国癌症研究中心(DKFZ)联合卢森堡健康研究所的研究团队在《Nature Communications》发表的最新研究，通过多组学整合分析揭示了CLL淋巴结中T细胞的动态变化规律，并发现了可干预的免疫治疗新靶点。

研究采用五大关键技术：1) 质谱流式(CyTOF)分析22例CLL患者淋巴结/外周血/骨髓样本的T细胞表型；2) 单细胞RNA测序(scRNA-seq)联合TCR测序解析5例配对样本的转录组和克隆多样性；3) 15色多重免疫荧光对42例CLL淋巴结组织芯片(TMA)进行空间分析；4) 计算机预测工具predicTCR筛选肿瘤反应性T细胞克隆；5) TCL1小鼠模型验证galectin-9阻断的治疗效果。

定义CLL中T细胞景观的质谱流式分析

通过42抗体panel分析5.2×10⁶个T细胞，鉴定出30个亚群。淋巴结中CD8⁺ T细胞呈现梯度耗竭特征：从CD8 T_EM GZMK(前体耗竭)到CD8 T_EX CD39(终末耗竭)。空间分析显示PD-1⁺ T细胞与CD4 T_REG存在显著共定位，形成免疫抑制微环境。

单细胞测序揭示耗竭轨迹

scRNA-seq识别出16个T细胞簇，拟时序分析显示CD8⁺ T细胞从初始状态(T_N)经效应记忆(T_EM)向耗竭状态(T_EX)分化。关键转录因子TOX和TCF-7分别标记终末耗竭和干细胞样前体亚群。

TCR克隆与肿瘤反应性预测

淋巴结中检测到克隆扩增的CD8⁺ T细胞富集(12-76%)。通过predicTCR算法预测12.7%的LN T细胞具有CLL反应性，显著高于外周血(7.3%)。GLIPH2分析发现部分克隆与已知CMV表位交叉反应，提示病毒共感染可能影响T细胞应答。

galectin-9-TIM3互作轴的验证

细胞互作网络分析显示CLL细胞高表达galectin-9(LGALS9)与T细胞TIM3(HAVCR2)结合。在TCL1小鼠模型中，抗galectin-9治疗使脾脏TIM3⁺ CD8⁺ T细胞减少47%，疾病进展延迟(P=0.02)。TCGA数据分析显示LGALS9高表达与肾癌、胶质瘤患者不良预后相关。

这项研究首次系统绘制了CLL淋巴结的免疫图谱，阐明galectin-9-TIM3轴是介导T细胞耗竭的关键机制。该发现不仅为CLL免疫治疗耐药提供了理论解释，更通过临床前实验验证了靶向galectin-9的治疗潜力。研究提出的"前体耗竭T细胞在淋巴结蓄积"的新概念，为优化免疫检查点抑制剂(ICI)的给药策略提供了重要依据。多组学整合分析框架也为其他肿瘤的微环境研究树立了方法论典范。