一种通过含有Cre重组系统的双腺相关病毒载体对神经元进行稀疏且高亮度标记的详细方案

《Anatomical Science International》：A detailed protocol for sparse and bright labeling of neurons via dual adeno-associated virus vectors with Cre recombination

双AAV病毒载体系统通过调整驱动向量与报告向量比例实现稀疏且高荧光神经元标记，方法涵盖立体定位注射和回视注射，提供详细试剂清单及操作指南。

　　

摘要

腺相关病毒（AAV）载体被广泛用于通过表达荧光蛋白来标记单个神经元。为了详细分析神经元形态，实现荧光蛋白的稀疏且强表达以清晰地观察细胞体、树突和轴突是非常重要的。然而，高滴度AAV载体的注射往往会导致过度标记细胞，而低滴度AAV载体的注射则会降低信号强度。在这里，我们提供了一个基于Supernova系统的详细分步方案，使用带有Cre重组系统的双重AAV载体来实现稀疏且明亮的神经元标记。我们准备了两种类型的AAV载体：一种是驱动载体（AAV2/1-SYN-iCre-BGHpA），它在神经元特异性启动子下表达Cre重组酶；另一种是报告载体（AAV2/1-SynTetOff FLEX-GFP），它编码带有翻转切除开关（FLEX）和Tet-Off系统的GFP。当将序列稀释的报告载体和高滴度驱动载体混合物通过立体定向注射到小鼠大脑中时，标记神经元的数量和GFP的荧光强度呈剂量依赖性下降。相反，稀释驱动载体可以减少表达GFP的细胞数量，同时保持GFP的荧光强度较高。此外，这种方法通过视网膜后注射AAV2/B10载体也表现出良好的系统递送效果。该方案包括全面的试剂清单、逐步注射程序和故障排除提示，使研究人员能够通过立体定向注射和视网膜后注射两种方式可靠地实现稀疏且明亮的标记。