基于液相色谱串联质谱技术的全血中Δ9/Δ8-THC异构体、植物大麻素及六氢大麻酚的一步微型化提取分析方法

为解决大麻素检测中样本处理复杂、通量低的问题，瑞士巴塞尔大学团队开发了一种基于96孔板格式的微型化一步提取法，结合UHPLC-MS/MS技术，实现了全血中14种大麻素（包括Δ9/Δ8-THC异构体、HHC及其代谢物）的高灵敏度检测。该方法仅需50μL样本，回收率≥88%，LOQ达0.5μg/L，成功应用于CBD富集大麻吸入者的药代动力学研究，为法医毒理学和临床监测提供了高效解决方案。

　　

随着全球大麻合法化进程加速，Δ⁹-四氢大麻酚(Δ⁹-THC)作为主要精神活性成分，在毒驾检测和 workplace drug testing 中扮演关键角色。然而，当前大麻素检测面临三大挑战：一是传统方法需要复杂的前处理步骤（如液液萃取或固相萃取），耗时且样本需求量大；二是新兴半合成大麻素如Δ⁸-THC和六氢大麻酚(HHC)的涌现，因其与Δ⁹-THC结构相似易导致检测干扰；三是工业大麻(CBD富集产品)中微量Δ⁹-THC可能突破法定驾驶阈值，亟需高灵敏度多组分分析方法。

瑞士巴塞尔大学生物医学工程系法医学研究所的Manuela Carla Monti团队在《Journal of Chromatography A》发表研究，建立了基于96孔板格式的微型化一步提取结合超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UHPLC-MS/MS)的分析方法。研究人员通过优化有机溶剂比例（乙腈:甲醇=1:1）和样本体积（50μL全血），采用Kinetex XB-C18色谱柱实现Δ⁸/Δ⁹-THC及其羧酸代谢物的基线分离（除羟基代谢物共洗脱外），并验证了方法在ICH M10和GTFCh指南下的可靠性。

关键技术包括：1）96孔板格式的蛋白质沉淀提取（150μL溶剂/孔）；2）10分钟梯度洗脱程序（0.1%甲酸-甲醇体系）；3）正/负离子模式切换检测（Δ⁹-THCA采用负离子模式）；4）七种不同血样验证基质效应（RSD≤7%）；5）应用稳定同位素内标校正（如Δ⁹-THC-D₃）。研究队列包含4名吸入300mg CBD富集大麻（含0.64% Δ⁹-THC）志愿者的系列血样。

研究结果显示：

1. 方法学性能：所有分析物在0.5-25μg/L范围内线性良好（r²≥0.995），Δ⁹-THC的LOQ为0.5μg/L（满足瑞士1.5μg/L驾驶限值）。Δ⁸-THC-OH与Δ⁹-THC-OH虽共洗脱，但通过特征离子比差异（0.3 vs 1.0）可实现鉴别。

2. 稳定性数据：-80℃储存7周后，Δ⁹-THC和CBD降解约15%，而羟基/羧基代谢物稳定性更佳。

3. 实际应用：在CBD富集大麻使用者中，Δ⁹-THCA和CBG等次要大麻素仅在吸入后20分钟内检出，Δ⁹-THC-COOH则在5小时仍可定量，证实方法对短期暴露标志物的捕获能力。

这项研究的创新性体现在三方面：首先，将样本处理步骤从传统多步萃取简化为单步沉淀，通量提升显著；其次，首次在10分钟内实现Δ⁸/Δ⁹-THC-COOH的基线分离，避免法规检测中的假阳性风险；最后，涵盖HHC等新兴半合成大麻素，为应对快速演变的毒品市场提供技术储备。研究局限性在于7-OH-CBD的LOQ需提升至2.5μg/L，且长期储存对部分大麻素稳定性的影响仍需深入评估。这些发现为大麻素检测标准化和毒理学数据解读提供了重要工具，尤其适用于大规模流行病学调查和法医实验室的常规筛查。