基于稀释进样LC-MS/MS技术的临床尿液药物筛查与确证分析方法开发与验证

本研究针对临床和法医毒理学中尿液多药物同时检测的需求，开发了一种快速、灵敏的"稀释进样"LC-MS/MS方法，可同时检测115种药物及其代谢物。该方法采用甲醇:乙腈(3:1)混合溶剂进行样本前处理，7.5分钟内完成分析，LOD/LOQ分别达到0.01-1.5/0.05-5 ng/mL，成功应用于戒毒康复项目的尿液监测，为临床毒理学筛查提供了高效解决方案。

　　

在临床和法医毒理学领域，尿液药物分析是诊断急性中毒、确定死亡原因、监测药物滥用和识别药物辅助犯罪的重要工具。然而，传统免疫分析法存在灵敏度不足的问题，而色谱-质谱联用技术虽然准确可靠，但前处理步骤繁琐耗时。特别是面对新型精神活性物质(NPS)的不断涌现，开发能同时检测多种药物类别的高通量分析方法成为迫切需求。希腊约阿尼纳大学医学院法医与毒理学系的研究团队在《Journal of Chromatography B》发表研究，开发并验证了一种基于"稀释进样"(DaS)前处理技术的LC-MS/MS方法，可同时筛查115种药物及其代谢物，为临床毒理学检测提供了高效解决方案。

研究人员采用优化后的甲醇:乙腈(3:1)混合溶剂进行样本前处理，建立7.5分钟快速梯度洗脱程序，在Q-Trap 5500⁺质谱仪上采用多反应监测(MRM)模式进行分析。方法验证包括选择性、灵敏度、基质效应、准确度、精密度和稳定性等指标，并应用于12周戒毒康复项目的167份尿液样本检测。

在"3.1 UPLC-MS/MS条件优化"部分，研究建立了涵盖115种化合物的MRM检测方法，采用正负离子切换模式，多数化合物设置3个特征离子对。图1展示了优化条件下所有分析物的色谱图。"3.2 样品制备"通过五种前处理方案比较，最终确定100 μL尿液加200 μL甲醇:乙腈(3:1)混合溶剂为最优方案，图2的热图直观显示了不同方案的提取效率差异。"3.3 方法验证"结果显示，方法LOD为0.01-1.5 ng/mL，LOQ为0.05-5 ng/mL，线性良好(R²>0.98)，基质效应在±25%内，回收率77-121%，日内和日间精密度RSD%分别≤16%和≤16%。"3.4 实际案例应用"部分，方法成功检测到阿米替林、可卡因、THC-COOH等14类药物，其中对乙酰氨基酚在19/22案例中被检出，案例#17和#19中发现免疫法漏检的可卡因滥用。

这项研究建立的DaS-LC-MS/MS方法具有三大显著优势：一是通量高，单次分析可覆盖10大类115种化合物；二是效率高，前处理仅需15分钟，分析时间7.5分钟；三是灵敏度好，多数化合物LOQ低于1 ng/mL。相比已有方法，该方法在保持广谱检测能力的同时大幅提升了分析效率，特别适合临床和法医毒理学的常规筛查。研究还发现，部分戒毒人员在康复期间仍存在处方药滥用或非法药物使用情况，凸显了严格药物监测的必要性。该方法的应用将为戒毒疗效评估、临床中毒诊断和法医毒理学调查提供强有力的技术支持，其"绿色化学"理念也符合现代分析技术的发展趋势。