基于多重PCR与斑点印迹法的比较研究：孟加拉国腹泻患者ETEC定植因子检测新策略

为解决传统斑点印迹法(dot blot)单克隆抗体受限问题，孟加拉国国际腹泻病研究中心(icddr,b)团队首次采用多重PCR技术对531例ETEC感染患者的定植因子(CFs)进行检测，发现CFA/I+CS21等组合为优势型别，验证了PCR法较dot blot检出率提升11%且更高效，为ETEC监测提供新技术方案。

　　

在发展中国家，由产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli, ETEC)引发的腹泻仍是重大公共卫生问题。这种病原体通过表面特殊的定植因子(Colonization Factors, CFs)黏附于小肠上皮，而准确识别CFs对疫苗研发和流行病学监测至关重要。传统检测依赖基于单克隆抗体的斑点印迹法(dot blot)，但抗体试剂的短缺严重制约了研究进展。

针对这一技术瓶颈，孟加拉国国际腹泻病研究中心（International Centre for Diarrhoeal Disease Research Bangladesh, icddr,b）的Md. Ariful Amin团队开展了一项创新性研究。通过对2023-2024年5914例腹泻患者的监测，研究人员首次建立多重PCR检测体系，系统评估了ETEC菌株的CFs分布特征，并与传统dot blot方法进行头对头比较。该成果发表于《Journal of Microbiological Methods》，为资源有限地区的ETEC监测提供了更优解决方案。

研究采用三大关键技术：1）基于热不稳定毒素(LT)和热稳定毒素(ST)基因的PCR初筛从531例ETEC感染者获取菌株；2）建立包含CFA/I、CS1-CS7及CS21等靶标的多重PCR检测体系；3）用157株菌株平行比较PCR与dot blot的检测效能。结果显示：

毒素型别分布

通过LT/ST-PCR分型发现，ST单一毒素型占比最高(40%)，LT+ST混合型(38%)次之，单一LT型仅22%，反映ST可能为当地优势毒力因子。

CFs流行特征

新型多重PCR检出率达51%，显著识别出四大流行CFs组合：CFA/I+CS21、CS6±CS21、CS5+CS6及CS1+CS3+CS21。值得注意的是，CS21作为辅助定植因子，在CFA/I或CS6阳性株中PCR法较dot blot多检出11%，揭示传统方法可能低估其流行率。

方法学验证

157株平行检测显示两种方法高度一致(Kappa值>0.85)，但PCR在操作时长(4小时vs 2天)、成本及通量方面优势显著，特别适合大规模筛查。

该研究首次证实多重PCR可作为dot blot的替代方案，其高敏感性尤其适合CS21等易被忽视的CFs检测。对于正在开展ETEC疫苗临床试验的孟加拉国而言，精准的CFs流行病学数据将直接指导疫苗组分选择。更重要的是，该方法突破抗体依赖的技术壁垒，为其他发展中国家建立自主监测体系提供范本。未来研究可进一步优化引物组合，纳入新发现的CFs靶点以保持技术前瞻性。