综述：蛋白质动力学在分子伴侣功能中的核心作用——来自溶液核磁共振的见解

这篇综述创新性地探讨了利用植物病毒衣壳蛋白体外组装病毒样颗粒（VLPs）递送抗HIV糖蛋白嵌合抗原受体（CAR）mRNA的技术路径，系统比较了与慢病毒载体、腺相关病毒（AAV）及脂质纳米颗粒（LNPs）在基因递送效率、RNase抗性和靶向性方面的优劣，为HIV等疾病的体内T细胞疗法提供了新思路。

　　

INTRODUCTION

免疫系统的复杂性在CD8⁺（杀伤性）T细胞中体现得尤为显著。这类细胞作为抵御病毒感染和癌细胞的关键防线，其功能调控成为近年研究热点。传统嵌合抗原受体（CAR）T细胞疗法需经历体外改造、扩增和回输的繁琐流程，而新兴的体内递送技术正试图突破这一瓶颈。

CURRENT STATE-OF-THE-ART OF T-CELL THERAPY

从19世纪观察到细菌感染引发的肿瘤消退现象，到现代利用CAR-T技术靶向CD19等B细胞标志物，免疫疗法已跨越百年。现行方案多依赖慢病毒或电穿孔技术进行基因修饰，但存在插入突变风险和制备周期长的缺陷。

Adeno-Associated Virus vector particles

腺相关病毒（AAV）载体因其非复制特性和低免疫原性备受关注。其生产依赖三质粒共转染系统，包含目的基因（GOI）、衣壳蛋白基因和辅助病毒基因。然而，AAV载体负载容量有限（<4.7kb），且难以实现T细胞特异性靶向。

T CELL-TARGETED, IN VITRO-ASSEMBLED VIRUS-LIKE PARTICLES

豇豆花叶病毒（CCMV）衣壳蛋白组装的VLPs展现出独特优势：

1. 二十面体对称结构允许抗体精准偶联

2. 4.2:1的衣壳蛋白-mRNA质量比确保剂量可控

3. 热稳定性优于脂质纳米颗粒（LNPs）

   实验证实，携带10E8抗HIV CAR mRNA的CCMV VLPs在RNase A处理后仍能介导有效转导。

CCMV VLPs packaging an anti-HIV glycoprotein CAR mRNA yield CAR expression in electroporated CD8 T cells, despite RNase treatment

通过电穿孔将VLP递送的CAR mRNA导入CD8⁺T细胞后：

• 流式细胞术检测到>60%的CAR表达率

• 体外杀伤实验显示HIV感染细胞清除率提升3倍

• 冷冻电镜揭示mRNA被包裹在直径28nm的完整衣壳内

IN VITRO-ASSEMBLED VIRUS-LIKE PARTICLES AND IN VIVO T CELL THERAPY

人源化小鼠模型显示：

• 静脉注射靶向CD8抗体修饰的VLPs后

• 脾脏T细胞CAR表达峰值出现在72小时

• 血浆病毒载量下降2个数量级

METHODS

技术亮点包括：

• pET载体表达带His标签的CCMV衣壳蛋白

• 透析法组装VLPs时严格控制NaCl梯度（1M→0.1M）

• RNase抗性测试采用0.0167μg/μg RNA的苛刻条件

该体系为发展"即用型"免疫疗法提供了新范式，其模块化设计可快速适配不同靶点。未来需优化VLP的肝脏截留问题，并探索组合疗法增强持久性。