基于单管重组酶聚合酶扩增-光敏比色法的即食食品中单核细胞增生李斯特菌快速检测技术

本文开发了一种创新的单管RPA-PCA联用技术（重组酶聚合酶扩增-光敏比色法），通过特异性靶向hly基因实现即食食品中单核细胞增生李斯特菌（L. monocytogenes）的快速检测。该方法在1.5小时内可达到1000 CFU/mL的裸眼检测限，经8小时富集后灵敏度提升至5 CFU/mL，对260份加标样品的检测准确率达90%，为食品安全现场筛查提供了高效解决方案。

　　

【亮点速览】

本研究创新性地将重组酶聚合酶扩增(RPA)与光敏比色检测(PCA)整合于单管反应体系，攻克了传统检测中气溶胶污染难题。通过精准设计的hly基因引物，实现对"冰箱杀手"单核细胞增生李斯特菌的特异性识别，检测灵敏度媲美qPCR但无需复杂仪器，为即食食品供应链安全监管提供革命性工具。

【材料与仪器】

实验所用寡核苷酸序列由上海生工生物合成（详见表S2），菌株信息见表S3。关键设备包括Milli-Q超纯水系统（电阻率18.2 MΩ?cm^-1）及便携式比色检测装置。即食食品样本涵盖卤肉、香肠等6大类，所有试剂均可冻干保存，极大提升现场检测适用性。

【特异性引物设计】

针对李斯特菌属27个物种的基因组比对发现，编码溶血素的hly基因在致病性L. monocytogenes中具有独特保守区段。设计的RPA引物可有效区分同源性达78.07%的L. ivanovii，其引物-模板复合物在37-42°C下20分钟内即可完成指数级扩增，为后续PCA检测奠定基础。

【结论】

该单管RPA-PCA系统将检测全流程压缩至1.5小时，配合智能手机"PCA"分析APP，在保留qPCR级灵敏度（5 CFU/mL）的同时，完美规避了开盖操作导致的10⁹拷贝/0.1μL气溶胶污染风险。冻干试剂盒设计更使其成为冷链物流和家庭冰箱微生物监控的理想选择。