基于W/O/W佐剂的恶臭假单胞菌幽灵疫苗在尼罗罗非鱼中的免疫保护效力及机制研究

本研究创新性开发了恶臭假单胞菌幽灵疫苗(PPGs)，采用海绵样简化法制备并配伍W/O/W（水包油包水）佐剂系统。实验证实该疫苗能显著激活尼罗罗非鱼的体液免疫（血清IgM提升）和细胞免疫（IL-1β等基因上调），接种后10周相对存活率(RPS)达97.2%，为水产养殖中细菌性疾病防控提供了安全高效的新型疫苗解决方案。

　　

Highlight

采用海绵样简化方案成功制备恶臭假单胞菌幽灵疫苗(PPGs)，通过NaOH等试剂的最低抑菌浓度(MIC)精确控制裂解过程。扫描电镜显示PPGs完整保留表面拓扑结构，而琼脂培养验证其完全灭活特性，为后续免疫研究奠定基础。

Fish and ethics considerations

所有实验均遵循埃及Assiut大学动物伦理委员会标准（批号06/2023/0128），严格符合ARRIVE指南。选用均重50±5g的健康尼罗罗非鱼，在26±1℃循环水系统中适应性饲养两周，确保实验条件标准化。

Evaluation of the viability and quality of the prepared PPGs

通过微量滴定法测定裂解试剂临界浓度：NaOH 1.875 mg/mL、SDS 0.237 mg/mL、H₂O₂ 12 mg/mL、CaCO₃ 1.05 μg/mL。制备的PPGs在营养琼脂上零生长，扫描电镜显示典型凹陷状幽灵结构，蛋白印迹证实外膜蛋白OprF保留率达92.3±4.7%。

Discussion

相比传统裂解法，本方案使抗原回收率提升38%，且未检测到残留DNA（<15 ng/mg）。佐剂组在接种后第10周仍维持高抗体效价（1:1024），显著高于普通PPGs组（1:256）。转录组分析显示MHC-II α基因表达上调17.5倍，揭示其激活抗原呈递细胞的关键机制。

Conclusion

该研究突破性地将W/O/W佐剂系统与细菌幽灵技术耦合，创建了具有"双持续"特性的疫苗平台——既维持抗原缓释 depot effect，又通过TLR4/MyD88通路增强免疫记忆，为水产疫苗研发提供了新范式。