快速检测食品中市售贻贝和扇贝的实时荧光定量PCR方法的开发与验证

本研究开发了针对双壳纲贻贝目(Mytilida)和扇贝目(Pectinida)的两种实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测系统，通过特异性引物和探针设计，实现了对23种双壳类物种的高特异性检测（交叉测试80余种动植物），检测限(LOD12)分别达1 pg和0.1 pg，食品基质灵敏度为10 mg/kg，适用于烹饪和高压灭菌样品，为食品过敏原检测提供了标准化解决方案。

　　

亮点

样本

本研究样本来自本地超市、网店、FRoSTA AG公司，以及德国联邦风险评估研究所(BfR)国家饲料动物蛋白参考实验室的样本库，具体样本信息见表1。

DNA提取

采用标准方法提取DNA（具体方法未展开描述）。

引物设计与物种特异性

• 贻贝目系统：基于13个贻贝目物种的16S rRNA基因序列比对设计引物探针（图1a）

• 扇贝目系统：通过19个扇贝目16S rRNA序列比对开发

  交叉测试显示：两个系统对约80种动植物（含23种双壳类）具有高度特异性。唯一例外是贻贝系统与大西洋海扇贝(Placopecten magellanicus)出现微弱交叉反应（Ct值32），经NCBI数据库比对推测可能源于16S rRNA序列相似性。

讨论

这两个覆盖重要食用双壳类的检测系统展现出卓越特异性。灵敏度方面：

• 扇贝目系统LOD₁₂达0.1 pg DNA

• 贻贝目系统LOD₁₂为1 pg DNA

  食品基质检测灵敏度均为10 mg/kg。实验证实系统可有效检测经烹饪/高压处理的样品，且通过多参数PCR验证了稳定性。

结论

本研究建立的贻贝目和扇贝目实时荧光定量PCR检测方法具有以下优势：

1. 高特异性（覆盖23种商业相关物种）

2. 超高灵敏度（最低0.1 pg DNA检出）

3. 强抗干扰能力（适应复杂食品基质）

   为食品过敏原监管和标签真实性验证提供了可靠技术支撑。