美国犬源犬恶丝虫大环内酯类耐药相关SNP的全国性监测研究及其流行病学意义

本研究针对犬恶丝虫(Dirofilaria immitis)对大环内酯类(ML)药物日益严重的耐药性问题，通过全美22州310份临床样本的SNP分子标记分析，首次证实ML耐药基因型在密西西比河下游流域(LMRV)以外广泛分布，其中31%为耐药型、33.2%为混合型。该成果为全球心丝虫病防控策略提供了关键分子流行病学依据。

　　

随着气候变化和宠物跨境流动加剧，犬心丝虫病在全球范围内呈现扩散趋势。作为该病主要防控手段的大环内酯类(Macrocyclic Lactones, ML)药物，自1998年以来在美国东南部陆续出现疗效下降报告，但难以区分是真正的耐药性问题还是用药依从性不足所致。犬恶丝虫(Dirofilaria immitis)这种通过蚊媒传播的线虫，其成虫寄生于犬类肺动脉引发的慢性感染可导致心力衰竭甚至死亡。尽管ML类药物如伊维菌素(ivermectin)自1987年投入使用以来一直是预防金标准，但耐药虫株的出现正威胁着全球防控成果。

Zoetis公司兽医医学研发中心(Veterinary Medicine Research and Development, 300 Portage Street, Kalamazoo, MI, USA)的研究团队在《International Journal for Parasitology: Drugs and Drug Resistance》发表了一项开创性研究。通过为期三年的全国性监测，首次系统评估了ML耐药相关单核苷酸多态性(SNP)在美国的地理分布特征。研究人员从22个州的45家诊所收集310份微丝蚴阳性血液样本，采用Fluidigm Access Array系统进行目标区域扩增，通过Illumina MiSeq/NextSeq平台对9个SNP位点测序，并基于临床验证的2-SNP模型（SNP1: Scaffold nDi.2.2scaf00046 76278; SNP2: Scaffold nDi.2.2scaf00046 22857）进行基因型分类。

【样本分布与特征】

84份样本来自阿拉巴马州、48份来自佐治亚州，共占总量51.6%。宿主犬中52.6%为雄性，73.9%年龄小于6岁，仅11.3%有预防用药记录，包括Advantage Multi^?、Heartgard Plus^?等12种产品。

【SNP分子标记分析】

测序数据显示9个SNP位点的等位基因频率呈现明显分化。通过2-SNP模型判定：111份(35.8%)为敏感型(SUS)，96份(31.0%)为耐药型(RES)，103份(33.2%)为混合型(MIX)。值得注意的是，SNP1与SNP2的等位基因频率相关性高达R=0.90。

【地理分布特征】

耐药样本不仅存在于传统的LMRV疫区，还出现在密歇根州（3例混合型，原籍佐治亚/阿肯色）和新泽西州（1例耐药型，原籍弗吉尼亚）等非典型区域。路易斯安那州样本耐药率最高(51.7%)，而佐治亚州敏感型占70.8%，显示显著地域差异。

这项研究颠覆了"ML耐药仅局限在LMRV"的传统认知，证实耐药基因型已在美国形成广泛传播网络。研究采用的2-SNP模型为区分真实耐药病例与用药依从性问题提供了分子诊断工具，其定位的染色体3区域（WSI_2.2基因组中SNP1:8326593，SNP2:8273382）为后续耐药机制研究指明方向。值得注意的是，混合感染样本占比超过三分之一，提示野外种群可能存在更复杂的耐药演化动态。这些发现警示兽医从业者：在制定预防方案时需充分考虑区域耐药风险，同时对跨州运输的犬只实施更严格的筛查。该研究建立的监测框架和分子技术平台，为全球心丝虫病耐药性监测提供了重要范式。