家禽和牲畜饲料中粪肠球菌与屎肠球菌的毒力特征、生物膜形成及耐药性分析

本研究针对孟加拉国家禽和牲畜饲料中Enterococcus faecalis和E. faecium的流行现状，通过PCR筛查、耐药表型检测及毒力基因分析，发现51株阳性分离株中19株为E. faecalis（54.29%）、32株为E. faecium（68.09%），其强生物膜形成能力与多重耐药性（MAR指数0.3-0.5）显著相关，尤其对氨苄青霉素（AMP）耐药率达66.6%-100%，并携带agg/pil/fsrB/fsrC等毒力基因，为饲料安全监管提供重要依据。

　　

在当今全球抗生素耐药性(AMR)危机背景下，动物饲料作为耐药菌传播的潜在媒介备受关注。孟加拉国作为畜牧业快速发展的国家，其饲料安全与公共卫生的关联性亟待探究。粪肠球菌(Enterococcus faecalis)和屎肠球菌(E. faecium)作为医院感染的主要机会致病菌，其生物膜形成能力与多重耐药特性使得问题更加复杂。

针对这一科学问题，孟加拉农业大学兽医科学学院微生物与卫生学系的研究团队开展了一项创新性研究。他们从当地三个地区的84份商业饲料样本（56份家禽饲料和28份牲畜饲料）中分离菌株，通过表型结合分子生物学方法，系统分析了这两种肠球菌的流行特征、耐药谱系及致病机制。相关成果发表在《Journal of Applied Poultry Research》上，为发展中国家饲料安全管理提供了重要数据支撑。

研究采用的关键技术包括：1) 基于ddl基因的PCR特异性检测；2) 刚果红琼脂(CRA)生物膜形成能力分级评估；3) 纸片扩散法检测10类抗生素的耐药表型；4) 多重PCR检测agg/pil/fsrB/fsrC等毒力基因及bla_TEM耐药基因。样本来源于迈门辛地区三个不同地点的市售饲料。

【结果与讨论】

1. 流行特征：

   PCR检测显示饲料中E. faecium检出率(68.09%)显著高于E. faecalis(54.29%)，家禽饲料阳性率(66.07%)是牲畜饲料(50%)的1.3倍。这种差异可能与不同饲料的加工储存条件有关。

2. 生物膜形成：

   CRA试验发现57.89%的E. faecalis和50%的E. faecium具有强生物膜形成能力。值得注意的是，强生物膜形成菌株中pil基因检出率高达93.75%，暗示菌毛蛋白可能参与生物膜基质构建。

3. 耐药特征：

   氨苄青霉素(AMP)耐药最为普遍（E. faecalis 66.6%-100%，E. faecium 84%-85.71%），且42.85%的分离株呈现多重耐药(MDR)。基因检测显示bla_TEM基因在两类菌株中的携带率均超过50%，解释了β-内酰胺类抗生素的高耐药现象。

4. 毒力基因谱：

   E. faecium的毒力基因携带率整体更高，其中pil基因(90.62%)和agg基因(75%)最为突出。统计学分析发现fsrC基因与强生物膜形成呈正相关(p<0.05)，提示群体感应系统可能调控耐药性与致病性的协同进化。

【结论与意义】

该研究首次证实孟加拉国饲料中存在携带多重毒力基因、具有强生物膜形成能力的耐药肠球菌，其MAR指数(0.3-0.5)已超过安全阈值。特别值得关注的是，饲料分离株对WHO列为"关键重要"的抗生素如万古霉素(VA)和利奈唑胺(LNZ)已产生耐药性，这种耐药谱系可能通过食物链传播至人类病原菌。

研究成果为理解AMR在"饲料-动物-环境-人类"传播链中的关键节点提供了新证据，建议：1) 将肠球菌监测纳入饲料安全标准；2) 严格管控饲料中抗生素的使用；3) 开展跨物种耐药基因转移机制研究。该团队建立的ddl基因PCR检测方案和生物膜分级标准，可为发展中国家饲料微生物风险评估提供技术参考。未来研究应扩大样本量并追踪耐药菌从饲料到动物产品的传播路径。