小鼠盲肠内容物与粪便中短链脂肪酸的免衍生化LC-MS高灵敏度分析方法开发

本文推荐一种创新的免衍生化LC-MS（液相色谱-质谱联用）方法，通过混合模式色谱柱（结合亲水相互作用与阴离子交换）和优化离子化条件（以氟化铵替代甲酸铵），显著提升短链脂肪酸（SCFAs，C2-C4）检测灵敏度，为肠道菌群代谢研究提供高效工具。

　　

Highlight

本研究开发了一种免衍生化LC-MS方法，用于分析小鼠盲肠内容物和粪便中的主要短链脂肪酸（SCFAs，C₂-C₄）。通过混合模式色谱柱（结合亲水相互作用色谱HILIC与阴离子交换色谱）实现高效分离，并发现用氟化铵（AmF）替代甲酸铵（AmFor）可显著缓解离子抑制效应。选择性反应监测（SRM）模式进一步降低生物样本背景噪音，验证结果显示该方法灵敏度高、实用性强，是肠道微生物研究的理想工具。

Materials

氟化铵（AmF）购自和光纯药工业（大阪），甲酸铵（AmFor）购自Honeywell Fluka。乙酸（AA）、丙酸（PA）、丁酸（BA）均来自东京化成工业（TCI）。

Instruments and MS conditions

采用Agilent HPLC系统与质谱联用，质谱条件为负离子模式电喷雾电离（ESI）。

LC Separation of targeted SCFAs (C2-C4)

通过优化色谱柱发现，混合模式色谱柱对SCFAs的保留能力显著优于传统HILIC柱（如二醇柱、酰胺柱）。氟化铵作为添加剂可避免甲酸铵导致的信号抑制，提升C₂-C₄分离效率。

Conclusion

该方法成功实现了生物样本中SCFAs的免衍生化检测，未来可扩展至其他有机酸分析（需重新优化条件）。

（注：翻译部分已省略文献引用和图表标识，专业术语保留英文缩写并标注中文解释，如HILIC=亲水相互作用色谱）