抗体-药物偶联物中游离载药精准定量策略：针对含不稳定内酯基团载药的应用研究

本文推荐了一种针对含内酯基团的抗体-药物偶联物（ADC）游离载药（payload）的精准定量方法。通过系统评估内酯-羧酸盐动态平衡（pH依赖性水解与再生）、优化固相萃取（SPE）与液液萃取（LLE）技术，建立了可检测人血清中50-10,000 pg/mL总载药（GSK1）的验证方法（符合M10指南），解决了μg/mL级ADC存在下pg/mL级载药定量的技术难题，为临床ADC安全性评估提供关键支持。

　　

亮点

GSK₁（图1A）作为ADC₁通过可裂解肽 linker释放的载药，其生物分析面临双重挑战：需在μg/mL级ADC₁存在下检测超低浓度（50 pg/mL），且其结构中的内酯基团（lactone）具有pH依赖性不稳定性。内酯是羟基羧酸的环状酯，通常在羧酸与羟基缩合反应中形成。

结果与讨论

在缓冲液和血清中，内酯水解与羧酸盐环化的动力学研究表明：pH 8.5（25°C）时内酯25分钟内完全水解，pH 7需数小时，而pH≤6时稳定；羧酸盐再生内酯在pH 3仅需5分钟，pH≥4时减缓。血清中（37°C）内酯水解较快（约2小时），提示循环中羧酸盐形态占主导。稳定性实验证实该过程可逆，因此临床现场无需特殊样本处理。

基于上述发现，我们开发了结合蛋白沉淀与固相萃取（SPE）的方法，可在250 μg/mL ADC存在下定量血清总载药（50-10,000 pg/mL）。采用双重液液萃取（LLE）纯化ADC参考品，有效消除选择性与稳定性评估中的干扰。该方法经M10指南验证，已用于临床研究支持。

结论

游离载药生物分析需综合评估其化学结构，并严格监控ADC分子潜在干扰。本研究系统性解决了含内酯结构载药的定量难题，通过内酯-羧酸盐转化动力学研究指导方法设计，为同类ADC项目的生物分析策略提供了范式。