基于LC-FAIMS-MS/MS联用技术的脉络膜新生血管蛋白质组学特征研究及其在nAMD治疗中的意义

本研究针对视网膜色素上皮/脉络膜(RC)组织样本量少、蛋白质组分析难度大的问题，开发了优化的LC-FAIMS-MS/MS工作流程。温州医科大学眼视光医院团队在nvAMD小鼠模型中鉴定出7047种蛋白质，发现HTRA1、CCDC80等295个差异表达蛋白，揭示了ECM重塑与免疫失调在CNV中的关键作用，为nAMD治疗提供了新靶点。

　　

在眼科疾病研究领域，视网膜色素上皮/脉络膜(RC)组织如同视网膜的"后勤保障中心"，其功能异常直接威胁视力健康。然而这个多细胞构成的精密组织存在样本获取困难、尤其是小鼠模型样本量极少的瓶颈，严重制约了疾病相关功能蛋白质的系统研究。这一困境在新生血管性年龄相关性黄斑变性(nvAMD)研究中尤为突出——作为致盲的首要病因，其核心病理特征脉络膜新生血管(CNV)的形成机制仍存在大量未解之谜。

针对这一挑战，温州医科大学眼视光医院的研究团队在《Journal of Proteomics》发表创新成果。他们巧妙地将高场不对称波形离子迁移谱(FAIMS)装置与Orbitrap Fusion Lumos质谱仪联用，通过系统优化液相色谱(LC)、FAIMS和串联质谱(MS/MS)参数，建立了适用于微量RC样本的深度蛋白质组分析方案。该技术使蛋白质鉴定数量从常规LC-MS/MS的5500个跃升至7047个，为揭示CNV分子机制打开了新窗口。

关键技术包括：1)建立整合LC-FAIMS-MS/MS的三维分离检测体系；2)采用nvAMD小鼠模型获取RC组织；3)结合跨物种多组学数据进行差异表达分析；4)运用生物信息学方法构建蛋白质互作网络(PPI)。

研究结果揭示：

1. 蛋白质组覆盖扩展：优化的LC-FAIMS-MS/MS工作流程使蛋白质鉴定效率提升28%，成功捕获包括低丰度蛋白在内的7047种蛋白质。

2. 关键调控因子鉴定：发现295个nvAMD相关差异蛋白，其中细胞外基质(ECM)重塑调控因子HTRA1(丝氨酸蛋白酶)和CCDC80(胶原相互作用蛋白)表达显著改变。

3. 免疫-ECM调控网络：PPI分析显示SYK(脾酪氨酸激酶)和CTSS(组织蛋白酶S)等免疫相关蛋白与ECM降解蛋白形成功能模块。

4. 通路协同机制：功能富集发现中性粒细胞趋化、ECM组织和PI3K-Akt信号通路共同参与CNV进程，提示免疫微环境失调与ECM降解存在交叉对话。

这项研究通过技术创新突破了微量RC组织蛋白质组分析的瓶颈，首次系统描绘了nvAMD进程中ECM重塑与免疫调控的协同作用网络。发现的HTRA1-CCDC80-SYK-CTSS调控轴为理解CNV发病机制提供了新视角，其中SYK介导的免疫信号与HTRA1主导的ECM降解的互作关系尤其值得关注。研究成果不仅为开发针对ECM-免疫双重调控的联合治疗策略奠定基础，其建立的LC-FAIMS-MS/MS工作流程更为其他难以获取的微量组织样本研究提供了普适性技术方案。该工作将蛋白质组学技术在眼科研究中的应用推向了新高度，对复杂眼病的精准诊疗具有重要指导价值。