综述：基于酶抑制和竞争（生物）反应功能方案的高效抗氧化剂检测

这篇综述系统总结了基于酶抑制和竞争生物反应的抗氧化剂(AOx)检测方法，重点探讨了酶(如AChE、TYR、XOD)、纳米酶、DNA和脂质等生物分子在评估抗氧化活性(AA)、抗氧化容量(AC)和总抗氧化容量(TAC)中的创新应用，并指出标准化和便携式设备开发是未来方向。

　　

酶抑制方法在抗氧化检测中的应用

酶催化过程中，抑制剂与底物竞争结合活性位点是实现抗氧化检测的核心机制。乙酰胆碱酯酶(AChE)、酪氨酸酶(TYR)、α-淀粉酶等代谢酶常作为探针，通过测定半数抑制浓度(IC₅₀)或抑制区(ZOI)来评估抗氧化效果。例如，从药用植物Vanda roxburghii分离的香兰素对AChE的IC₅₀达84.66 μg/mL，而熊果酸在Nepeta物种提取物中对碳酸酐酶(CA)的抑制常数K_i为2.24 μmol/L。值得注意的是，蛋白质激酶A(PKA)的氧化还原调控机制使其成为双功能电化学传感器的理想靶点，可同时检测激酶活性和多酚抑制效应。

竞争性相互作用的新型检测策略

化学发光试剂如鲁米诺与H₂O₂的氧化体系，通过抗氧化剂对光信号的竞争性淬灭实现检测。纳米酶的突破性应用尤为亮眼：铂纳米酶催化3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)显色反应，可检测葡萄籽中低至2.0 μmol/L的原花青素；而Ce-SrMOFs类过氧化物酶在智能手机传感平台中，对唾液抗氧化物的检测限达44 nM。金属有机框架(MOF)衍生的双金属催化剂如Fe₃Ni-MOF，其米氏常数K_m比天然辣根过氧化物酶(HRP)低50倍，显著提升了检测灵敏度。

核酸与脂质生物标记物的保护效应

双链DNA(dsDNA)生物传感器通过监测碱基氧化损伤构建抗氧化评估体系。当使用Cu²⁺/H₂O₂体系产生羟基自由基(HO•)时，咖啡提取物能使DNA存活率提升至70%。琼脂糖凝胶电泳则显示，Prangos aricakensis中的氧普瑞伐托林可使pBR322质粒超螺旋形式保留45.37%。在脂质体系中，低密度脂蛋白(LDL)氧化实验表明，Clitoria ternatea花提取物能抑制34%的铜诱导氧化，其效果接近阳性对照儿茶素。

方法标准化与技术革新挑战

当前检测方法的异质性突出表现在：DPPH法仅适用于有机溶剂体系，而TRAP荧光法易受基质干扰。建议采用QUENCHER原则建立统一标准，同时开发集成微流控芯片与智能手机RGB分析的便携设备。纳米酶传感器阵列结合三色底物(TMB/OPD/ABTS)可实现对5种抗氧化剂的同步区分，为复杂样本分析提供新思路。

未来展望

植物次级代谢产物与纳米材料的协同效应、酶抑制机制的分子动力学模拟、以及唾液抗氧化谱的即时检测，将成为抗氧化研究的下一个前沿。特别需要关注生物分子探针在预测体内行为方面的局限性，这要求开发更精确的细胞抗氧化检测模型。