慢性淋巴细胞白血病多克隆选择起源机制揭示：BCR特征驱动CD5+B细胞克隆竞争

《Haematologica》推荐：本研究通过高通量测序技术解析57例慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者CD5+B细胞的IGHV-IGHD-IGHJ重排特征，首次揭示所有患者均存在额外克隆(ADC)，平均每个患者携带12个>1细胞/μL的扩增克隆。研究发现优势ADC( pADC1-3)具有与临床相关克隆(CRC)相似的IGHV突变模式、同种型分布和BCR定型特征，证实CLL发生是多克隆选择过程，为BCR信号通路在白血病发生中的核心作用提供新证据。

　　

慢性淋巴细胞白血病(CLL)作为最常见的成人白血病类型，其发病机制一直是血液肿瘤领域的重点课题。传统观点认为CLL是单克隆CD5⁺B细胞的恶性增殖，但临床观察发现部分患者存在多个B细胞克隆，这种现象是偶然事件还是普遍规律？背后隐藏着怎样的生物学机制？来自热那亚大学（University of Genoa）实验医学系Davide Bagnara团队在《Haematologica》发表的研究，通过创新性的实验设计揭开了这一谜题。

研究团队采用独特的分子标签(UMI)标记和高深度测序技术，对57例初治CLL患者的循环CD5⁺B细胞进行全IGHV-IGHD-IGHJ重排分析。关键技术包括：1）磁珠分选CD19⁺CD5⁺细胞群体；2）UMI标记的mRNA逆转录技术；3）高通量测序结合生物信息学分析（pRESTO流程）；4）IMGT/HighV-QUEST数据库比对；5）ARResT/AssignSubsets定型BCR分析。所有样本均设置2-8个技术重复，确保数据可靠性。

【研究结果】

1. 实验设计：建立覆盖>250万读长/样本的分析体系，UMI共识序列确保克隆定量准确性。46例可获得淋巴细胞计数的患者中，96%存在>1细胞/μL的ADC。

2. 克隆频率特征：所有患者均检出ADC，平均每个患者存在12个扩增克隆。其中2例ADC达到CLL诊断标准(>5×10³/μL)，8例符合高计数单克隆B细胞增多症(MBL)标准。

3. 纵向动态：11例随访患者中，82%的pADC₁持续存在且多数扩增，22%发生克隆更替。值得注意的是，3例患者pADC₁是唯一可检测的额外克隆。

4. IGHV特征：pADC_1-3的IGHV1-69(未突变型)和IGHV4-34(突变型)使用频率与CRC相似，显著区别于健康对照。55% pADC呈现>2%的IGHV突变，与CRC突变状态显著相关(P<0.007)。

5. 定型BCR：ADC中CLL样定型重排频率(0.36%)是健康CD5⁺细胞的4倍，但低于CRC(17%)。发现4例患者存在多个定型重排，其中CLL1046携带5个不同但属于subset 1的克隆。

这项研究颠覆了传统认知，证明CLL本质上是一个多克隆选择过程。关键发现包括：1）所有患者都存在多克隆扩增，提示这是CLL发生的普遍特征；2）优势ADC具有与CRC相似的BCR特征，包括IGHV基因偏好、突变模式和定型重排；3）克隆动态显示ADC可能参与持续的转化竞争。这些发现支持"早期起源假说"——造血干细胞或B系祖细胞的遗传异常可能导致多克隆转化，最终通过BCR介导的选择压力筛选出优势克隆。该研究为理解CLL发病机制提供了新框架，对早期干预和BCR靶向治疗策略制定具有重要指导意义。