基于SWATH采集的UHPLC-ESI-QTOF-MS/MS血小板脂质组学研究中跨批次特征对齐的批量数据分析

本文创新性地构建了HuT78-STAT5-luc报告细胞系，建立了首个通过国际人用药品注册技术协调会（ICH）Q2(R2)验证的胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）单抗生物活性检测报告基因分析法（RGA）。该方法基于TSLP-TSLPR/IL-7Rα-STAT5信号通路，通过四参数回归实现精准定量，为抗TSLP单抗药物的质量控制提供了MOA（作用机制）代表性解决方案。

　　

Highlight

细胞系与试剂

HuT78细胞系和HEK293T细胞系购自ATCC。RPMI-1640培养基、胎牛血清（FBS）和青霉素-链霉素（Pen-Strep）购自Gibco。Zeocin筛选试剂购自Invitrogen，Bright-Glo^TM荧光素酶检测系统来自Promega，TSLP蛋白购自SinoBiological，抗TSLP单克隆抗体由正大天晴药业提供。

HuT78-STAT5-luc细胞系的构建

为建立抗TSLP单抗生物活性检测的RGA，我们将STAT5响应元件驱动的荧光素酶序列通过慢病毒转导稳定整合至天然表达IL-7Rα/TSLPR的HuT78细胞。通过10 ng/mL TSLP刺激筛选出13个响应克隆，其中#10克隆因具有最高相对荧光值（RLU）和信噪比（SNR）被命名为HuT78-STAT5-luc（图1A）。该细胞系在TSLP刺激下可显著激活STAT5信号通路。

结论

我们成功构建了特异性响应TSLP-STAT5信号通路的报告细胞系，并建立了符合MOA原理的用户友好型报告基因检测法，完成全流程方法优化与验证。随着抗TSLP单抗药物的快速发展，本RGA将为该类药物的质量控制提供重要技术支撑。

CRediT作者贡献声明

侯淑婷：论文撰写、方法建立、数据收集、概念设计；杨博佳：方法验证、实验操作；王兰：论文修订、课题指导；余传飞：论文修订、研究设计；王军志：研究指导、资金支持。

利益冲突声明

作者声明不存在可能影响研究结果的利益冲突。

致谢

本研究获国家卫健委生物技术产品质量研究重点实验室（2023SKLDRS0112）和中国科学院战略先导科技专项（XDC0200000）资助。