基于免疫肽组学的AAV9衣壳新型免疫优势CD8 T细胞表位图谱研究及其在基因治疗中的意义

这篇研究通过MHC关联肽蛋白质组学(MAPPs)技术，首次系统鉴定了AAV9衣壳蛋白经HLA I类分子递呈的天然CD8 T细胞表位，发现9个新型免疫优势表位（9-13氨基酸），其激活的T细胞与重叠肽激活群体无交叉反应。研究为临床监测AAV基因治疗中衣壳特异性T细胞应答提供了新策略，并为通过表位工程降低载体免疫原性奠定基础。

　　

引言

腺相关病毒(AAV)载体因其高效转导能力和良好安全性成为基因治疗明星载体，目前已有6款AAV疗法获FDA批准，包括治疗视网膜营养不良的Luxturna^?和治疗脊髓性肌萎缩的Zolgensma^?。然而AAV衣壳蛋白引发的CD8 T细胞应答会攻击转导细胞，导致治疗失效，这在血友病临床试验中表现为肝转氨酶升高与凝血因子表达丢失的关联现象。现有临床监测采用覆盖衣壳蛋白的重叠15肽(O/L肽)，但无法反映天然递呈的免疫肽组特征。

材料与方法

研究通过亲和捕获-酸洗脱(ACE)法筛选76名健康供体，最终纳入10名AAV9血清阳性与10名阴性者。采用三类肽库：O/L肽库(182条15肽)、I类MAPPs肽库(41条HLA I类递呈肽)、II类MAPPs肽库(12条HLA II类递呈肽)。通过10天PBMC体外扩增结合FluoroSpot检测IFN-γ分泌，采用13个矩阵池(每池6-7肽)进行表位解卷积，并通过尿素变性实验和EC50测定验证表位-HLA结合稳定性与亲和力。

结果

直接检测的局限性

新鲜PBMCs中未检测到衣壳特异性T细胞，即使抗体滴度最高的供体#526也无反应，提示循环中此类T细胞频率极低。

肽库特异性应答

扩增实验显示：O/L肽扩增的T细胞80%对同源肽有反应，但对MAPPs肽无交叉反应；而MAPPs肽扩增的T细胞55%对同源肽应答，其中I类MAPPs肽主导反应(40% vs II类20%)。CD4细胞剔除实验证实I类MAPPs肽激活的主要是CD8 T细胞。

新型表位发现

从41条I类MAPPs肽中鉴定出10个免疫优势表位，包含9个新表位。13肽SVAGPSNMAVQGR在表达A68:01等位基因供体中反应率达100%，而9肽VAGPSNMAV无反应。值得注意的是，虽同为A02:01限制性表位，新发现的10肽FQFSYEFENV在62.5%等位基因阳性供体中激活T细胞，而文献报道的9肽LIDQYLYYL则无反应，尽管两者结合亲和力相当(0.6 nM)。

长度偏好现象

在含9/10/11肽的簇中，仅11肽NMAVQGRSVA能激活B*40:02阳性供体的T细胞；类似地，13肽比其嵌套的9肽更具免疫优势，提示CD8 T细胞对长表位的识别具有选择性。

讨论

本研究首次揭示AAV9衣壳天然递呈的表位特征：

1. 长度多样性：9-13肽均可形成稳定pHLA复合物，13肽SVAGPSNMAVQGR打破传统"9肽主导"认知；

2. 临床相关性：新发现的A*02:01限制性表位FQFSYEFENV可覆盖20%美国人群；

3. 监测策略优化：天然表位检测比O/L肽更精准，如供体#440对I类MAPPs肽反应强度达SI≥10；

4. 免疫逃逸设计：通过突变FQFSYEFENV等表位可能降低载体免疫原性。

该发现为基因治疗中衣壳免疫应答监测提供了分子基础，未来需在患者队列中验证这些表位的临床相关性，并探索其与AAV载体中和抗体产生的关联机制。