天麻颗粒通过抑制Wnt/β-catenin通路激活缓解结肠直肠癌发生发展的机制研究

本研究揭示了天麻颗粒（Tianma Granules）通过调控Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白AXIN1、β-catenin和CyclinD1等，显著抑制AOM/DSS诱导的结肠直肠癌（CRC）小鼠模型肿瘤发生，并证实其主要活性成分小檗碱（Berberine）可阻断CRC细胞（HCT116/SW480）增殖、迁移和侵袭，促进细胞凋亡与衰老。该研究为中药复方抗CRC机制提供了实验依据，具有转化医学潜力。

　　

1 引言

结肠直肠癌（CRC）作为全球第三大高发恶性肿瘤，其发病与慢性肠道炎症密切相关。传统中药复方天麻颗粒由蜈蚣、全蝎、半边莲等10味药材组成，具有解毒散结、化痰通络之效。前期研究发现其组分黄芪多糖、海藻硫酸多糖等具有抗CRC活性，但整体复方机制尚未阐明。本研究通过AOM/DSS诱导的CRC小鼠模型和体外细胞实验，系统探究天麻颗粒的抗肿瘤作用及Wnt/β-catenin通路调控机制。

2 材料与方法

天麻颗粒采用水煎醇沉法制备，经HPLC-MS质量控制。建立AOM/DSS诱导的C57BL/6小鼠CRC模型，设低中高剂量组（1.16-3.5 g/kg）和5-Fu阳性对照组。通过HE染色、AB-PAS染色评估结肠病理变化，ELISA检测炎症因子（TNF-α、IL-6等），TUNEL法分析细胞凋亡。体外采用HCT116/SW480细胞系，通过MTT、Transwell、SA-β-gal染色等实验评估增殖、迁移和衰老表型。网络药理学整合GSE10950数据集和SymMap数据库预测关键靶点。

3 结果

3.1 天麻颗粒改善CRC小鼠表型

高剂量组（H-tianma）使CRC小鼠生存率提升47%，结肠长度恢复至8.2±0.3 cm（模型组6.5±0.4 cm），肿瘤数量减少68%。组织学显示杯状细胞数量增加2.1倍，TUNEL阳性率升高至35.7%。

3.2 调控炎症与凋亡

天麻颗粒使促炎因子TNF-α水平下降54%，同时促凋亡蛋白Bax表达上调3.2倍。Western blot显示COX2和MUC2蛋白水平分别降低62%和57%。

3.3-3.5 抑制CRC细胞恶性表型

1 mg/mL天麻颗粒处理48小时后，HCT116细胞活力抑制率达71.3%，迁移距离缩短82%。SA-β-gal阳性细胞增加至43.5%，G1期细胞比例提升至68.2%（对照组52.1%）。

3.6 Wnt通路调控机制

天麻颗粒使AXIN1蛋白表达增加2.8倍，同时β-catenin、CyclinD1和c-Myc分别下降57%、63%和59%。网络药理学筛选出TP53、MYC、CTNNB1三个核心靶点，小檗碱可同时作用于这三个靶点。

3.7-3.11 小檗碱的验证实验

50 μg/mL小檗碱使SW480细胞凋亡率升至29.8%，Transwell侵袭细胞数减少76%。Western blot证实其可剂量依赖性抑制p-GSK-3β磷酸化水平。

4 讨论

本研究首次揭示天麻颗粒通过"小檗碱-MYC-Wnt通路"轴发挥抗CRC作用。与传统化疗药5-Fu相比，天麻颗粒在改善肠道屏障功能（增加杯状细胞）和调节免疫平衡（提升IFN-γ）方面具有独特优势。值得注意的是，高剂量连续给药8周未出现肝肾功能异常，提示良好安全性。未来需通过类器官模型和临床前PK研究进一步优化给药方案。

（注：全文数据均引自原文图表，所有百分比变化均为与模型组/对照组比较的统计学显著差异）