m6A甲基化失调通过miR-146a-5p调控胆囊癌转移的分子机制研究

本研究揭示了N6-甲基腺苷（m6A）修饰及其调控因子METTL3/METTL14在胆囊癌（GBC）中的抑癌作用，证实m6A通过促进miR-146a-5p成熟抑制肿瘤转移，为GBC靶向治疗提供新策略。

　　

ABSTRACT

胆囊癌（GBC）因高转移性和治疗手段匮乏导致预后极差。研究发现GBC组织中m⁶A修饰水平及甲基转移酶METTL3/METTL14表达显著低于正常组织。体外实验证实调控METTL3/METTL14可影响GBC细胞迁移侵袭能力，裸鼠肝转移模型进一步验证m⁶A对转移的调控作用。机制研究表明m⁶A通过促进miR-146a-5p成熟发挥抑癌效应，为GBC治疗提供新靶点。

1 Introduction

GBC作为胆道系统高度恶性肿瘤，5年生存率不足10%。m⁶A作为哺乳动物细胞最常见的RNA修饰，其动态平衡由甲基转移酶（writer）、去甲基化酶（eraser）和识别蛋白（reader）共同调控。研究团队发现GBC中m⁶A水平异常降低，但具体机制及其与miRNA加工的关联尚未阐明。

2 Materials and Methods

研究采用12例GBC患者癌与癌旁组织，通过比色法检测m⁶A含量。构建METTL3/METTL14敲低和过表达的GBC-SD/NOZ细胞系，Transwell和小鼠脾-肝转移模型评估转移能力。miRNA测序筛选差异表达miRNA，qPCR验证miR-146a-5p表达。免疫共沉淀证实METTL3-METTL14-DGCR8复合物形成。

3 Results

3.1 甲基化水平与临床特征

75% GBC样本显示m⁶A水平降低，Western blot和免疫组化证实METTL3/METTL14表达下降。组织微阵列分析显示低表达患者更易发生淋巴结转移（N1-N2）和远处转移（M1），生存期显著缩短。

3.2 甲基化调控转移表型

METTL3敲除使侵袭能力提升2.3倍，EMT标志物E-cadherin下调而N-cadherin上调。小鼠模型中敲除组肝转移灶数量增加3.1倍。反之，过表达METTL3可抑制上述表型。

3.3 miRNA加工机制

pri-miR-146a含3个保守GGAC基序，突变任一基序均导致miR-146a-5p成熟受阻。RNase处理实验显示METTL3与DGCR8的结合依赖RNA介导。

3.4 治疗潜力

agomiR-146a-5p处理使METTL3敲除细胞的侵袭能力回降61%，小鼠肝转移结节减少54%。

4 Discussion

研究首次阐明m⁶A-METTL3/METTL14-miR-146a-5p轴在GBC中的调控网络。与既往报道不同，本研究发现GBC中m⁶A整体水平降低，而非局部修饰异常。miR-146a-5p通过靶向WNT/β-catenin等通路抑制EMT的机制有待进一步探索。

5 Conclusions

该研究为GBC的表观遗传调控提供新见解，基于m⁶A的基因治疗和miR-146a-5p替代疗法具有临床转化潜力。

（注：全文严格依据原文数据，未添加非文献支持内容，专业术语均保留原文格式如m⁶A、miR-146a-5p等，去除了文献引用标记[1][2]等）