RUNX1e6::RUNX1T19a（AEe69a）剪接变体在t(8;21)急性髓系白血病中的预后价值及机制研究

本研究针对t(8;21)急性髓系白血病（AML）中RUNX1::RUNX1T1（AE）融合基因剪接变体的异质性，首次发现新型剪接变体RUNX1e6::RUNX1T1（AEe6）与经典AE的100%共表达特征，并揭示其与不良预后的相关性。通过构建AEe6与AE9a共表达的AEe69a模型，证实该变体通过改变细胞周期、抑制凋亡和分化促进白血病进展，且对化疗药物阿糖胞苷敏感性降低，但对JAK2抑制剂TG101209敏感。研究成果为t(8;21)AML的精准分型和靶向治疗提供新依据。

　　

在急性髓系白血病（AML）的复杂分子图谱中，t(8;21)(q22;q22)易位形成的RUNX1::RUNX1T1（AE）融合基因一直是研究焦点。尽管携带AE的患者通常预后较好，但约30%会在一年内复发，这种异质性被认为与AE的剪接变体相关。既往研究已发现AE9a、AEtr等变体，但其临床意义存在争议。更关键的是，现有研究忽略了不同变体间的协同作用，这可能是导致结论矛盾的重要原因。

山西医科大学第二医院的研究团队通过分析117例t(8;21)AML样本，首次报道了由RUNX1第6外显子与RUNX1T1第2外显子融合的新型剪接变体AEe6。临床数据显示，AEe6阳性患者5年复发率高达44.4%（阴性组25%），中位总生存期（OS）仅13个月（阴性组22个月）。令人意外的是，细胞实验显示AEe6与经典AE类似，能抑制增殖并促进凋亡。这一矛盾现象促使研究者深入探索AEe6与已知不良预后标志物AE9a的关系。

通过RT-PCR和高分辨率电泳技术，团队发现AEe6与AE9a存在97%的共表达率，并将共表达变体命名为AEe69a。生存分析显示，AEe69a阳性患者预后最差（OS 13个月，DFS 9个月）。分子建模揭示，AEe69a蛋白的RUNT和NHR1结构域发生构象改变，且缺失抑制白血病的NHR3/4结构域。功能实验证实，K562-AEe69a细胞相比野生型加速G0/G1期向S/G2M期转换（G0/G1期占比29.73% vs 35.01%），凋亡率降低至0.97%（K562-AE组13.7%），并显著抑制粒细胞分化标志物CD10/CD16表达。药物敏感性分析指出，AEe69a细胞对阿糖胞苷的敏感性仅为经典AE的50%，但对JAK2抑制剂TG101209反应更佳。

关键技术包括：1）从117例t(8;21)AML患者队列中筛选剪接变体；2）通过RT-PCR和Sanger测序鉴定AEe6/AE9a；3）使用MigR1载体构建K562细胞模型；4）流式细胞术分析细胞周期和凋亡；5）CCK8和软琼脂克隆形成实验评估增殖能力。

表达与预后分析

SET1引物扩增发现358bp的AEe6变体，测序验证其与AE的100%共表达。42.7%患者检出AEe6，其阳性组OS较阴性组缩短9个月（P=0.0053）。

细胞功能验证

K562-AEe6模型显示：48小时增殖抑制率与AE无差异（P>0.05），但凋亡率更高（23.3% vs 13.7%）。

协同效应机制

AEe69a的三维结构预测显示NHR1结构域β折叠增加，且缺失α螺旋。功能上促进S期进入（S期细胞增加7.5%），CD16表达降低82%（P<0.001）。

治疗策略探索

TG101209处理48小时后，AEe69a细胞增殖抑制率达70%，显著优于阿糖胞苷（35%）。

这项研究不仅揭示了AEe69a作为t(8;21)AML独立不良预后标志物的价值，更阐明了结构域变异导致的功能转换机制。特别是发现JAK2抑制剂可能成为AEe69a阳性患者的潜在靶向治疗方案，为临床决策提供了分子层面的理论依据。未来需要扩大样本验证AEe69a的预测效能，并探索其与其它突变（如C-KIT）的协同致白血病机制。

（论文发表于《Annals of Hematology》，作者包括Yuying Fan¹、Lanhui Chen¹等，通讯作者为Yanhong Tan¹和Hongwei Wang¹）