一种稳定且环境友好的UPLC方法同步测定利扎曲坦、美洛昔康及其相关N-亚硝胺杂质的研究

研究人员针对固定剂量复方制剂Symbravo中利扎曲坦、美洛昔康及其潜在致癌性N-亚硝胺杂质的同步检测难题，开发了基于Box-Behnken设计优化的UPLC方法。该方法采用30%乙腈-0.1%甲酸流动相（pH 2.5），0.2 mL/min流速，实现4种分析物的基线分离，验证显示线性范围5-30 μg/mL（R2>0.999），LOD低至0.47-1.39 μg/mL。通过ComplexGAPI、AGREE等绿色评估工具证实其环境友好性，为药品质量控制和亚硝胺监控提供高效解决方案。

　　

偏头痛治疗领域近年来出现创新性突破，固定剂量复方制剂Symbravo结合了5-HT_1B/1D受体激动剂利扎曲坦（Rizatriptan）和COX-2抑制剂美洛昔康（Meloxicam），通过双靶点协同作用缓解症状。然而，该组合药物面临严峻的质量挑战——原料药中可能存在的N-亚硝胺杂质（N-nitrosamine impurities）被国际癌症研究机构列为2A类致癌物，欧洲EMA和美国FDA已强制要求药品中此类杂质控制在ppm级。更棘手的是，现有分析方法无法同步检测两种主成分及其亚硝胺降解产物，传统HPLC方法在灵敏度和分离效率方面存在明显局限。

针对这一技术瓶颈，印度维格南科技基金会（Vignan’s Foundation for Science Technology and Research）的研究团队创新性地开发了基于质量源于设计（QbD）理念的超高效液相色谱（UPLC）分析方法。这项发表在《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis Open》的研究，通过系统性优化色谱条件，成功建立了全球首个能同步测定利扎曲坦、美洛昔康及其亚硝胺杂质（Nitroso rizatriptan Imp-1和Nitroso meloxicam Imp-1）的稳定性指示方法。

研究团队采用Box-Behnken实验设计（BBD）优化关键参数，通过光电二极管阵列（PDA）检测器在257.1 nm等吸收波长下检测，结合BEH Phenyl C₁₈色谱柱实现高效分离。样本前处理仅需甲醇溶解和0.22 μm滤膜过滤，显著简化操作流程。

方法开发与优化：通过15组BBD实验建立二次多项式模型，确定最佳条件为30%乙腈、0.2 mL/min流速和pH 2.5。3D响应面分析显示乙腈比例和流速对保留时间（RT）和拖尾因子（TF）影响显著，其中乙腈每增加10%可使RT缩短0.36分钟（Rizatriptan）和0.17分钟（Meloxicam）。

方法验证：线性范围覆盖5-30 μg/mL（主成分）和2-12 μg/mL（杂质），R2均>0.999。灵敏度方面，N-亚硝胺美洛昔康的检测限（LOD）达0.47 μg/mL。强制降解实验证实方法稳定性指示能力：酸降解产生3.62%美洛昔康降解物，氧化条件下利扎曲坦降解率达10.4%，但所有条件均能基线分离降解峰。

实际应用：分析商业制剂Symbravo显示98.9%含量一致性，成功检出0.5%水平的亚硝胺杂质。绿色评估中AGREE得分0.73，Analytical Eco-Scale达77分，体现环境友好特性。

该研究突破性地解决了复方制剂中亚硝胺杂质同步检测的技术难题。建立的UPLC方法不仅满足ICH Q2要求，其0.2 mL/min的低流速设计和最小化溶剂消耗（每次分析仅需1.5 mL流动相）更符合绿色化学原则。特别值得注意的是，该方法对N-亚硝胺杂质的检测能力达到监管要求的ppm级，为制药企业实施ICH M7指南提供了实用工具。研究团队创新的将实验设计（DoE）与绿色评估工具（如ComplexGAPI）相结合的策略，为现代药物分析方法开发建立了新范式。

这项技术的推广应用将显著提升抗偏头痛复方制剂的质量控制水平，其设计思路可延伸至其他含亚硝胺风险药物的分析。未来研究可进一步探索LC-MS/MS联用技术，以应对更复杂的降解产物分析需求。该成果标志着药物分析领域在兼顾分析性能与环境可持续性方面取得重要进展。