ADAMTS13抗CUB结构域抗体热点区域W1250/K1252/R1367的发现及其在免疫性血栓性血小板减少性紫癜(iTTP)中的致病机制研究

本研究揭示了免疫性血栓性血小板减少性紫癜(iTTP)患者体内抗CUB结构域抗体的关键靶点。荷兰Sanquin研究所团队通过氢氘交换质谱(HDX-MS)和丙氨酸扫描技术，首次鉴定出ADAMTS13中Trp1250/Lys1252/Arg1367组成的抗原表位，该发现为理解抗体介导的CUB-间隔区结构域界面破坏机制提供了新见解。

　　

在血液疾病的复杂图谱中，免疫性血栓性血小板减少性紫癜(immune-mediated thrombotic thrombocytopenic purpura, iTTP)始终是威胁生命的急症。这种疾病的本质在于机体产生了针对血管性血友病因子裂解酶ADAMTS13的自身抗体，导致微血管血栓形成。虽然90%以上患者的抗体会攻击ADAMTS13的间隔区(spacer domain)，但仍有20-40%的患者会产生针对CUB结构域的抗体——这些神秘抗体的作用机制长期笼罩在迷雾中。

来自荷兰Sanquin研究所分子血液学部的研究团队在《Blood Advances》发表的重要研究，如同拨开迷雾的探照灯，首次精准定位了抗CUB抗体在ADAMTS13上的"攻击坐标"。研究人员采用氢氘交换质谱(HDX-MS)这项能捕捉蛋白质动态结构变化的前沿技术，结合丙氨酸扫描 mutagenesis，从分子水平绘制了抗CUB抗体的"作战地图"。他们发现患者来源的单克隆抗体不约而同地瞄准了两个关键区域：CUB1结构域的1248-1253肽段和CUB2结构域的1359-1377肽段。更精确的定位显示，Trp¹²⁵⁰、Lys¹²⁵²和Arg¹³⁶⁷这三个氨基酸残基构成了抗体的核心靶点，当研究人员将这些位点突变为丙氨酸时，所有测试抗体的结合能力都显著减弱。

这项研究的技术路线体现了多维度验证的科学严谨性。研究人员首先通过HDX-MS锁定抗体结合引起的蛋白质构象变化区域，随后采用丙氨酸扫描精确定位关键残基，最后在27例iTTP患者血浆样本中验证临床相关性。特别值得注意的是，他们发现这些抗CUB抗体虽然不直接抑制酶活性，却能通过破坏spacer-CUB结构域界面诱导ADAMTS13的"开放构象"——这种构象变化可能是iTTP病理过程的重要推手。

研究结果部分揭示了多个重要发现：

1. 表位定位：HDX-MS分析显示所有测试的单克隆抗体均特异性结合CUB1(1248-1253)和CUB2(1359-1377)区域。

2. 关键残基鉴定：丙氨酸扫描证明W¹²⁵⁰/K¹²⁵²/R¹³⁶⁷组成的"热点三联体"是抗体结合的核心位点。

3. 临床验证：三重丙氨酸突变体(W1250A/K1252A/R1367A)在患者血浆测试中显示出普遍的结合抑制效果。

4. 功能分析：抗CUB抗体通过破坏结构域界面诱导构象变化，但不影响对肽底物或流动条件下VWF多聚体的酶活性。

这项研究的科学价值不仅在于解开了抗CUB抗体的分子识别密码，更重要的是揭示了iTTP发病的新机制——抗体通过破坏ADAMTS13的spacer-CUB结构域界面，导致蛋白质构象异常。这一发现为开发针对特定表位的精准诊断方法和靶向治疗策略提供了分子基础。正如通讯作者Jan Voorberg团队强调的，W¹²⁵⁰/K¹²⁵²/R¹³⁶⁷这一"热点三联体"的发现，可能成为未来设计小分子抑制剂或免疫耐受疗法的关键靶标。该研究也为理解其他自身免疫性疾病中抗体介导的蛋白质功能失调提供了范式参考。