利用合成遗传阵列筛选技术靶向CgPDR1+介导的唑类耐药机制：新型抗真菌辅助疗法的开发

这篇研究通过合成遗传阵列（SGA）筛选技术，系统解析了光滑念珠菌（Candida glabrata）中CgPDR1+突变介导的唑类耐药遗传互作网络，发现GCN5等关键靶点，并验证甲氨蝶呤（MTX）与氟康唑（FLZ）的协同抗真菌效应，为克服多药耐药（MDR）提供了新策略。

　　

解析CgPDR1⁺介导的唑类耐药遗传网络

光滑念珠菌（Candida glabrata）是侵袭性念珠菌病的第二大病原体，其高死亡率（63.6%）与快速发展的唑类耐药性密切相关。研究聚焦于CgPDR1基因的功能获得性突变（CgPDR1⁺），该突变通过激活转录因子CgPdr1p，上调ABC转运蛋白编码基因（如CgCDR1、CgCDR2和CgSNQ2），促进药物外排。目前已鉴定80余种CgPDR1⁺突变，可导致从单唑类耐药到泛唑类耐药的多样化表型。

合成遗传阵列筛选揭示核心靶点

研究采用合成遗传阵列（SGA）技术，以临床分离株的CgPDR1^R592S等位基因为模型，构建全基因组双突变体文库。筛选发现93个与CgPDR1特异性相关的合成致死（SL）或合成致病（SS）互作基因，其中5个基因（HEK2、GCN5、STE2、STE12和PDR8）在所有测试的CgPDR1⁺突变中均存在互作。值得注意的是，染色质重塑因子GCN5的缺失显著增强菌株对唑类的敏感性，其机制可能通过影响组蛋白乙酰化修饰（HAT模块）干扰耐药相关基因表达。

甲氨蝶呤的协同抗真菌效应

通过HIP HOP数据库的^{in silico}筛选，锁定免疫抑制剂甲氨蝶呤（MTX）为GCN5潜在抑制剂。体外实验显示，MTX单药在0.32 mg/mL时即可抑制光滑念珠菌生长，与FLZ联用后呈现剂量依赖性协同效应：在1.28 mg/mL MTX联合8 μg/mL FLZ条件下，对携带CgPDR1^R592S的临床菌株生长抑制率达100%。棋盘实验的分数抑制浓度指数（FICI）证实两者具有协同作用（FICI≤0.5）。此外，MTX在^{Galleria mellonella}模型中表现出低毒性，支持其临床转化潜力。

跨物种抗真菌活性拓展

研究进一步评估MTX对其它念珠菌属的抑制效果。除白念珠菌（C. albicans）外，MTX单药对耳念珠菌（C. auris）、都柏林念珠菌（C. dubliniensis）等均有显著抑制。温度实验表明，37℃下MTX与FLZ联用需更高浓度（0.32 mg/mL）才能完全抑制生长，提示宿主微环境可能影响药物疗效。

基因表达调控机制

定量PCR揭示，CgPDR1^R592S突变株在MTX处理后，GCN5和STE2表达上调而PDR1下调，暗示MTX可能通过干扰染色质重塑和MAPK信号通路逆转耐药。这种多靶点调控为开发广谱抗真菌辅助疗法提供了新思路。

临床意义与展望

该研究首次系统绘制CgPDR1⁺突变依赖的遗传互作图谱，证实SGA筛选在发现抗真菌靶点中的高效性。MTX的再定位应用不仅为克服MDR提供了即时解决方案，其与唑类的协同机制也为开发新型组蛋白乙酰化抑制剂奠定基础。未来需进一步优化MTX的给药方案，并探索其在侵袭性真菌感染联合治疗中的临床价值。