"苦参汤通过ASK1/JNK/Cx43信号通路抑制心肌细胞凋亡改善cTnTR141W转基因小鼠左心室重构的机制研究"

这篇研究揭示了传统中药复方苦参汤（KXD）通过调控ASK1/JNK/Cx43信号通路，在遗传性扩张型心肌病（DCM）模型cTnTR141W转基因小鼠和体外H9c2细胞中显著抑制心肌细胞凋亡、改善间隙连接（GJ）重构，从而缓解左心室重构。研究结合UPLC-Q-TOF-MS分析、RNA测序和实验验证，首次阐明KXD通过下调p-ASK1/p-JNK磷酸化、上调连接蛋白43（Cx43）表达发挥心脏保护作用，为DCM治疗提供了新靶点。

　　

苦参汤的药效物质基础

通过UPLC-Q-TOF-MS技术从小鼠血液中鉴定出苦参汤（KXD）的11种入血成分，包括新绿原酸、绿原酸（CGA）、隐绿原酸等。这些化合物已被报道具有调节凋亡和间隙连接的作用，如CGA通过促进ASK1与硫氧还蛋白结合抑制JNK磷酸化，为KXD的机制研究奠定物质基础。

动物模型验证心脏保护作用

在cTnT^R141W转基因小鼠中，KXD治疗4周后显著改善心脏功能指标：左心室收缩末期内径（LVESD）降低29.7%，射血分数（EF）提升41.5%（均P<0.0001）。组织学显示KXD组心肌细胞横截面积减少38.2%，胶原沉积面积下降52.4%，表明其有效抑制心室扩张和纤维化。

RNA测序揭示关键通路

KEGG富集分析发现KXD组差异基因显著富集于凋亡相关通路（如Hippo、cAMP信号通路）。蛋白互作网络显示间隙连接关键蛋白Cx43与肌动蛋白细胞骨架存在功能关联，提示KXD可能通过细胞连接结构调控心肌重构。

凋亡与间隙连接重塑的分子机制

在cTnT^R141W小鼠中，KXD使凋亡细胞比例从24.6%降至9.8%（P<0.0001），同时上调Cx43蛋白表达1.8倍（P<0.05）。透射电镜显示KXD组心肌细胞间隙连接宽度由15.3nm缩至9.7nm，接近野生型水平。Western blot证实KXD抑制ASK1（Ser966）和JNK（Thr183/Tyr185）位点磷酸化，下调促凋亡蛋白Caspase-9表达达47%。

体外实验佐证机制

多柔比星（DOX）诱导的H9c2细胞模型中，200μg/mL KXD使细胞凋亡率从35.2%降至18.5%（P<0.0001），同时恢复Cx43膜定位。值得注意的是，KXD对p-JNK的抑制效果呈剂量依赖性，100μg/mL剂量即可使其表达降低42.3%（P<0.01）。

临床转化意义

该研究首次将传统中药复方作用机制与心肌细胞电偶联调控相结合，提出"抑制ASK1/JNK磷酸化→维持Cx43稳定性→改善间隙连接传导→减少凋亡"的创新作用轴。其中鉴定的7种活性成分（如CGA、咖啡酸）为开发抗DCM先导化合物提供线索，而cTnT^R141W与DOX双模型的应用增强了结论的普适性。

局限性与展望

研究尚未通过基因敲除直接验证Cx43是否为KXD的必需靶点，未来需构建Cx43条件性敲除动物模型。此外，KXD中已鉴定的活性成分（如甘诺赛特D）对ASK1/JNK通路的特异性调控有待深入解析。