溶瘤病毒OVV-01联合NY-ESO-1 TCR-T细胞的"标记-杀伤"协同抗肿瘤机制研究

本研究创新性地构建了表达NY-ESO-1肿瘤抗原的减毒水疱性口炎病毒（VSV）载体OVV-01，通过"标记-杀伤"（Mark + Kill）策略，证实其不仅能选择性感染肿瘤细胞并诱导NY-ESO-1表达，还可显著增强NY-ESO-1特异性TCR-T细胞的抗肿瘤活性。该双机制疗法为实体瘤免疫联合治疗提供了新思路。

　　

溶瘤病毒OVV-01的构建与特性

研究团队基于水疱性口炎病毒（VSV）Mudd-Summer株构建了重组溶瘤病毒OVV-01，通过XhoI和NheI双酶切将NY-ESO-1基因插入VSV基因组G蛋白和L蛋白之间。该病毒在保持VSV固有优势（复制周期短、组织嗜性广、基因组小）的基础上，通过M51R突变进一步降低神经毒性，展现出良好的安全性特征。

体外实验显示，OVV-01对多种肿瘤细胞系具有显著细胞毒性。在MOI为0.1时，对小鼠肺癌LLC、结肠癌MC-38、乳腺癌4T1及人宫颈癌HeLa细胞的生长抑制率分别达80%、60%、33%和53%，显著高于空载病毒OVV-00。IC₅₀测定进一步证实，OVV-01对结直肠癌HCT116、HT-29和肺癌NCI-H446等细胞的半数抑制浓度均低于1×10⁵ PFU/mL。

肿瘤选择性复制特征

在H22肝癌小鼠模型中，单次静脉注射OVV-01后7小时，免疫组化检测显示肿瘤组织NY-ESO-1表达强度达3+（阳性率30%），而心、肝、脾等正常组织均未检测到表达。至48小时，虽然表达阳性率降至8%，但仍保持高强度信号，证实了病毒在肿瘤组织中的选择性复制能力。

免疫激活效应研究

在PBMC重建的B-NDG HLA A2.1小鼠模型中，OVV-01治疗显著促进了T细胞浸润。第14天时，肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）中hCD3⁺和hCD3⁺CD8⁺ T细胞比例较对照组提高2-3倍。值得注意的是，约1/3小鼠的外周血和肿瘤组织中可检测到NY-ESO-1特异性TCR-T细胞，提示病毒可诱导内源性NY-ESO-1特异性免疫应答。

协同抗肿瘤机制解析

体外共培养实验揭示了OVV-01与TCR-T细胞的协同作用机制：当MOI=5时，OVV-01感染使K562和A673细胞的NY-ESO-1表达率分别达85%和80%。这种抗原标记使TCR-T细胞的杀伤效率提升至60-70%（7AAD阳性率），IFN-γ分泌增加3-20倍，CD107a表达水平提升56.96%（K562）和31.5%（A673）。特别发现效应靶比（E:T）为1:1时T细胞活化效果最佳，提示适度抗原刺激更利于T细胞功能发挥。

体内疗效验证

在H22肝癌模型中，OVV-01治疗组肿瘤生长抑制率达42.92%，显著高于空载病毒组（14.88%）。更为重要的是，在Caski宫颈癌模型中，OVV-01单药（53.66%）与TCR-T单药（21.17%）联合使用时抑制率提升至67.18%，展现出明显的协同效应。

临床转化前景

该研究创新性地提出"标记-杀伤"双机制疗法：OVV-01通过选择性肿瘤感染实现抗原标记，而TCR-T细胞则执行精准杀伤。这种策略有效解决了实体瘤治疗中抗原异质性难题，为NY-ESO-1阴性肿瘤患者提供了新的治疗可能。目前OVV-01已进入研究者发起试验（IIT），初步临床数据证实其安全性良好，为后续转化研究奠定基础。未来可通过联合免疫检查点抑制剂、优化给药方案等策略进一步提升疗效。