miR-497基因敲除通过VEGFA和FGF2通路加剧碱烧伤诱导的小鼠角膜新生血管形成

本研究针对碱烧伤后角膜新生血管化(CNV)的治疗难题，通过构建miR-497基因敲除小鼠模型，首次揭示了该microRNA通过双重调控VEGFA和FGF2信号通路抑制CNV的分子机制。研究人员发现miR-497缺失会显著加重角膜混浊和炎症反应，为开发靶向多通路的抗血管生成疗法提供了新思路。

　　

在眼科疾病领域，角膜新生血管化(CNV)一直是临床治疗的重大挑战。作为眼球最外层的透明屏障，健康角膜本应保持无血管状态，但当遭遇化学烧伤等损伤时，这种精密的生理平衡就会被打破。碱烧伤尤其危险，强碱性物质会穿透角膜组织引发持续性炎症，最终导致异常血管长入透明角膜区。这些新生血管虽然试图修复损伤，却会引发角膜混浊、瘢痕形成，严重时甚至导致失明。当前临床使用的抗血管内皮生长因子(VEGF)单靶点疗法效果有限，迫切需要探索更有效的多靶点干预策略。

武汉大学人民医院眼科中心的研究团队将目光投向了microRNA这一基因调控的新兴领域。在《International Ophthalmology》发表的最新研究中，他们聚焦miR-497——这个在肿瘤领域已被证实具有抑制血管生成作用的微小RNA分子。通过构建碱烧伤小鼠模型，结合基因编辑技术和多组学分析，首次系统阐释了miR-497通过协同调控VEGFA和FGF2两条关键通路抑制CNV的分子机制。

研究采用CRISPR/Cas9技术构建miR-497基因敲除小鼠模型，以野生型C57BL/6小鼠作为对照。通过1M氢氧化钠滤纸片法建立标准化碱烧伤CNV模型，按时间点(0/2/4/7/14天)分组观察。采用裂隙灯显微镜评估角膜混浊程度，ImageJ软件量化新生血管面积。通过HE染色观察组织病理变化，免疫组化检测CD31（血管内皮标志物）、VEGFA和FGF2表达，RT-qPCR分析基因表达变化。

角膜病变程度分析

研究发现miR-497 KO组角膜混浊评分和新生血管面积均显著高于野生型组，损伤程度随时间延长而加重，第14天达到峰值。HE染色显示KO组角膜结构破坏更严重，可见大量充满红细胞的异常血管腔隙和炎性细胞浸润。CD31免疫组化证实KO组血管内皮标志物表达持续高于对照组，提示miR-497缺失加剧了血管增生。

VEGFA表达变化

免疫组化显示VEGFA表达与CNV进展呈正相关，第14天达峰值后逐渐下降。值得注意的是，miR-497 KO组各时间点VEGFA表达均显著高于野生型组，RT-qPCR结果与之吻合。相关性分析发现损伤后0-14天内，miR-497 mRNA与VEGFA mRNA水平呈现意外的高度正相关(R²=0.683)，研究者认为这可能反映急性病理状态下独特的动态调节机制。

FGF2调控机制

类似地，FGF2表达模式与VEGFA高度一致，在KO组中表达显著增强。两者mRNA水平变化趋势高度同步，且miR-497与FGF2 mRNA的相关系数更高(R²=0.786)。这提示在碱烧伤条件下，miR-497可能通过某种尚未明确的机制协同调控这两个关键促血管因子。

这项研究开创性地证实了miR-497在角膜疾病中的保护作用，其通过"双靶点刹车"机制同时抑制VEGFA和FGF2信号通路。相较于当前临床使用的单一VEGF抑制剂，这种天然的多通路调控模式展现出显著优势：一方面可更全面地阻断血管生成信号网络，另一方面可能减少单靶点疗法导致的代偿性通路激活。值得注意的是，研究还发现miR-497与促血管因子之间存在复杂的时间依赖性共表达关系，这为理解急性损伤后基因调控的动态平衡提供了新视角。

该成果为CNV治疗提供了新的分子靶点，提示开发基于miR-497的基因疗法或模拟物可能成为突破现有治疗瓶颈的有效策略。未来研究需进一步明确miR-497下游的具体作用靶点，并探索其与炎症因子如IL-6/STAT3通路的交互作用，为开发"抗血管-抗炎"联合疗法奠定基础。从转化医学角度看，这项发现不仅适用于碱烧伤治疗，对感染性角膜炎、角膜移植排斥等其他CNV相关疾病也具有重要借鉴价值。