利用异体CAR-NKT细胞克服卵巢癌对CAR-T细胞疗法的耐药性和免疫逃逸

本研究针对卵巢癌(OC)对传统CAR-T细胞疗法的耐药性和免疫逃逸难题，开发了基于造血干细胞工程化的异体CAR-NKT细胞(AlloCAR-NKT)。通过单细胞测序和流式分析发现OC肿瘤微环境(TME)中CD1dhi的肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)和髓系来源抑制细胞(MDSCs)是NKT细胞的天然靶点。研究证明AlloCAR-NKT细胞通过CAR/TCR/NKR多重靶向机制，在多种OC异种移植模型中展现出优于传统CAR-T细胞的疗效，同时具有更低的细胞因子释放综合征(CRS)风险和移植物抗宿主病(GvHD)风险，为OC治疗提供了新型"现货型"细胞疗法。

　　

卵巢癌作为妇科恶性肿瘤中最致命的类型，其治疗面临三大困境：确诊时多已晚期转移、铂类化疗后高复发率、以及免疫治疗响应率低。传统CAR-T细胞疗法在实体瘤中屡屡受挫，尤其面对卵巢癌这种具有高度异质性肿瘤细胞和免疫抑制性微环境的"顽固堡垒"。肿瘤微环境中大量的TAMs和MDSCs形成保护屏障，而肿瘤干细胞(CSCs)的存在更使治疗雪上加霜。加州大学洛杉矶分校(UCLA)的研究团队另辟蹊径，将目光投向了兼具T细胞和NK细胞特性的NKT细胞。

研究人员首先通过分析62例原发性OC患者样本（包括34例化疗初治样本和28例复发/新辅助化疗后样本）的单细胞转录组数据，揭示了OC的四大细胞亚群：分化型、干细胞样(CSC-like)、免疫反应型和增殖型。值得注意的是，复发样本中CSC-like细胞显著富集，这些细胞高表达间皮素(MSLN)和多种自然杀伤受体(NKR)配体。更关键的发现是，免疫抑制性的TAMs和MDSCs特异性高表达CD1d——这正是NKT细胞表面TCR的天然配体。这些发现为开发能同时靶向肿瘤细胞和免疫抑制微环境的CAR-NKT疗法提供了理论依据。

研究采用造血干细胞(HSPC)基因工程和临床导向的培养方法，成功构建了靶向MSLN的异体CAR-NKT细胞(^AlloMCAR-NKT)及其IL-15增强版本(^Allo15MCAR-NKT)。关键技术包括：单细胞TCR测序验证NKT细胞纯度、多组学分析(转录组、表观组)、建立原代患者样本库(35例)、多种人源化OC小鼠模型，以及创新的器官芯片培养系统。

研究结果部分，通过系列实验揭示了^AlloCAR-NKT细胞的独特优势：

"转录组和生物标志物分析"显示，OC复发样本中CSC-like细胞比例增加(从初治的15%升至28%)，这些细胞MSLN表达升高2.3倍。TME分析发现复发样本中CD8⁺T细胞减少40%，而CD206^hiHLA-DR^hi的免疫抑制性髓系细胞增加1.8倍。

"异体CAR-NKT细胞的生成"部分证实，通过6周培养可获得纯度>95%的产物，单细胞测序显示其TCR克隆性与PBMC来源NKT细胞相当。RNA-seq分析揭示^Allo15MCAR-NKT细胞高表达NK激活受体(如NKG2D、DNAM-1)，低表达抑制受体(如KIRs)，呈现独特的"低免疫原性"特征。

"体外抗肿瘤效果"部分显示，^Allo15p>MCAR