肿瘤细胞外囊泡表面蛋白-mRNA整合检测技术实现上皮性卵巢癌早期诊断突破

本研究针对上皮性卵巢癌(EOC)早期诊断难题，开发了基于FRα/MSLN/TROP2表面蛋白标记和MPP1/ACTB参考mRNA的EV SPRI检测技术。通过多组学筛选和临床验证，建立的EOC EV SPRI评分在训练队列(AUROC=0.99)和验证队列(AUROC=0.93)中显著优于血清CA125，对早期(I/II期)EOC和高级别浆液性癌(HGSC)分别达到0.93和0.97的鉴别效能，为EOC早期筛查提供了高灵敏度、低成本的新型液体活检方案。

　　

卵巢癌作为女性第五大癌症死因，其中90%为上皮性卵巢癌(EOC)，70%确诊时已属晚期。现有血清标志物CA125敏感性不足，影像学检查对早期病变识别有限，导致仅20%患者能在可治愈阶段获得诊断。肿瘤源性细胞外囊泡(EV)携带母细胞特征性表面蛋白和核酸，在血液中出现早且持续存在，为早期检测提供了理想靶标。

美国加州大学洛杉矶分校(UCLA)病理与检验医学系的研究团队开发了创新的EOC EV表面蛋白-mRNA整合(SPRI)检测技术。该研究通过多组学分析筛选出FRα、MSLN和TROP2三个互补性EOC EV表面标记，结合稳定表达的MPP1和ACTB参考mRNA，建立了两步法检测流程：先通过点击化学介导的EV Click Beads富集目标EV亚群，再通过RT-qPCR定量内参mRNA。在236例训练/验证队列中，EOC EV SPRI评分展现出0.99/0.93的AUROC，对早期EOC和HGSC亚型分别保持0.93和0.97的高鉴别效能，显著优于传统CA125检测。相关成果发表于《eBioMedicine》。

关键技术包括：(1)基于CCLE、TCGA等多组学数据的生物信息学筛选框架；(2)点击化学介导的EV富集技术；(3)参考mRNA稳定性验证体系；(4)包含81例EOC、61例良性卵巢肿块和90例健康对照的两中心队列研究；(5)逻辑回归模型构建的SPRI评分系统。

研究结果部分显示：

"FRα、MSLN和TROP2在EOC细胞和组织中强表达"：免疫荧光证实三种标记在OVCAR3/8细胞膜高表达，组织微阵列(TMA)显示97.6%的133例EOC样本至少表达一种标记，69.1%同时表达三种。

"EV Click Beads有效固定EOC EVs"：透射电镜(TEM)证实点击化学能特异性富集目标EV，免疫金标记显示CD63阳性EV被成功捕获。

"ACTB和MPP1 mRNA作为可靠定量标记"：数字PCR验证两种参考mRNA与EV数量线性相关(R²>0.98)，且能抵抗RNase降解。

"EOC EV SPRI检测线性范围优异"：合成血浆实验显示在4.0×10⁷-4.0×10¹⁰ EV/mL范围内保持R²>0.98的线性关系。

"训练队列验证SPRI评分效能"：逻辑回归模型整合FRα⁺/MSLN⁺/TROP2⁺ EV-MPP1信号，训练队列AUROC达0.99，留一法验证灵敏度100%/特异性88%。

"独立验证队列确认诊断性能"：验证队列保持0.93的AUROC，对早期EOC和HGSC分别达0.93和0.97，材料成本<$7/样本，全程<3小时。

该研究创新性地将EV表面蛋白富集与内参mRNA定量相结合，克服了传统液体活检技术的局限性。通过三标记互补策略有效覆盖EOC异质性，参考mRNA定量方案兼具稳定性和经济性。相比需要复杂设备的单EV分析技术，该方案更易实现临床转化。未来扩大队列验证后，可望与现有检测手段形成互补，提升EOC早期诊断率。研究还启示EV表面标记组合策略可拓展至其他癌症早筛领域，为液体活检技术发展提供新思路。