查加斯病巨食管患者的分子诊断：血清学阴性或不确定病例的精准检测突破

这篇前瞻性队列研究评估了分子检测（nPCR和qPCR）在血清学阴性/不确定的查加斯病（CD）巨食管患者中的诊断价值。研究通过复合参考标准（CRS）分析显示，卫星DNA巢式PCR（Sat-DNA nPCR）灵敏度达95%，特异性81%，阳性似然比（PLR）5.05，显著优于传统血清学检测，为临床疑难病例提供了重要诊断工具。

　　

1 引言

克氏锥虫（Trypanosoma cruzi）引起的查加斯病（CD）是全球第三大被忽视的热带病，慢性期患者中约10%会出现消化道病变，其中巨食管是最常见的临床表现。然而，部分患者呈现典型巨食管症状却伴随血清学阴性或不确定结果，与特发性贲门失弛缓症难以鉴别。传统诊断方法如血培养（BC）灵敏度低（慢性期仅21.7%阳性），而血清学存在与其它锥虫的交叉反应。分子检测如巢式PCR（nPCR）和实时定量PCR（qPCR）因其可检测极低载量寄生虫DNA（<1 Par.Eq./mL），成为解决诊断困境的新选择。

2 材料与方法

研究纳入三组：I组（26例血清学阴性/不确定巨食管患者）、II组（33例血清学阳性巨食管患者）和III组（10例健康对照）。采用复合参考标准（CRS）评估四种检测：

• 血培养：20mL血样接种LIT培养基，观察150天

• 巢式PCR：靶向卫星DNA（Sat-DNA，149bp）和动基体DNA（kDNA，330bp），采用TCZ1-4和S35-36引物

• 定量PCR：TaqMan探针检测Cruzi 1/2/3序列，标准曲线涵盖10⁶-10^-2 Par.Eq./mL

3 结果

• 血培养：II组仅22.7%（5/22）阳性，I组全部阴性

• 巢式PCR：Sat-DNA在I组检出率76.9%（20/26），显著高于kDNA的34.6%（p=0.0014）

• 定量PCR：I组38.4%可定量检测，但42.3%结果不确定（≤0.01 Par.Eq./mL）

• 诊断效能：Sat-DNA nPCR以95%灵敏度（95%CI:82%-99%）和5.05 PLR成为最佳指标，而血清学PLR仅2.14

4 讨论

研究首次系统验证分子检测对血清学阴性巨食管的诊断价值。Sat-DNA nPCR的高敏感性可能源于其多拷贝靶点特性，而qPCR的局限性反映慢性期低间歇性寄生虫血症特点。值得注意的是，I组76.9%通过分子检测确诊，提示部分患者可能感染了DTU V/VI型克氏锥虫——这些亚型表达的抗原可能逃逸常规血清学检测。该发现为开发覆盖全DTU的血清学试剂提供了理论依据。

5 临床意义

对于流行病学阳性但血清学阴性的巨食管患者，Sat-DNA nPCR应作为一线补充检测。未来需优化qPCR预处理流程以提高检出率，并探索不同DTU与消化道病变的关联机制。本研究为修订CD诊断指南提供了关键证据，尤其对非 endemic 地区的误诊病例具有重要指导价值。