奥地利多动物源多杀性巴氏杆菌表型与基因型耐药性检测及方法学优化研究

这篇综述通过比较三种肉汤微量稀释法（CAMHB、LHB及LHB+CO2）对奥地利276株多杀性巴氏杆菌（P. multocida）的耐药性检测效果，结合全基因组测序分析，揭示了LHB补充法在耐药基因检测中的优势，填补了奥地利该病原体耐药性监测空白，为临床抗生素选择提供重要依据。

　　

引言

多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida）是兽医领域的重要病原体，其耐药性存在显著地域差异。奥地利此前缺乏系统性监测数据，且现有研究多聚焦表型检测。本研究首次对奥地利多动物源P. multocida进行表型与基因型耐药性综合分析，并评估不同培养方法对检测结果的影响。

材料与方法

276株分离株涵盖农场动物、宠物、野生动物及人类，采用三种肉汤微量稀释法（标准CAMHB、补充2.5%裂解马血的LHB、以及LHB+5-10% CO₂）测试16种抗生素敏感性，应用CLSI兽医专用折点。通过全基因组测序鉴定耐药基因，并比较表型与基因型结果的一致性。

结果

表型检测：牛源分离株中20%携带至少1个耐药基因，猪源为9%。四环素类（tet(H)/tet(Y)）、氨基糖苷类（aph(3″)-Ib）和磺胺类（sul2）基因最常见。LHB+CO₂法在猪源菌株中导致大环内酯类（如替米考星）假阳性率高达74%，而CAMHB法因生长不良可能漏检耐药株。牛源菌株中，LHB法对氨苄西林呈现61%假阳性率，但能有效检出四环素和氟苯尼考耐药基因。

基因型分析：牛源菌株中10%携带≥3类耐药基因，猪源为3%。首次在P. multocida中检出林肯酰胺核苷酸转移酶基因lnu(F)。氟喹诺酮类耐药由parC基因突变（如Glu84Lys）介导。

方法学比较：CAMHB法在猪源菌株中表型-基因型一致率达99.6%，但30%牛源菌株需人工复核；LHB法总体一致性较高（猪97.6%，牛91.3%），而LHB+CO₂法因非特异性浊度导致显著偏差（猪81.1%）。

讨论

研究揭示了奥地利P. multocida耐药率低于欧洲平均水平，但多重耐药株的出现值得警惕。LHB补充法虽存在氨苄西林假阳性问题，仍是平衡检测灵敏度和特异性的最优选择。CO₂富集环境会干扰大环内酯类结果解读，建议遵循CLSI标准方法。

结论

建立国家级兽医病原体耐药监测计划迫在眉睫。推荐使用LHB补充法进行P. multocida药敏试验，避免CO₂富集导致的误判。该研究为临床抗生素合理应用及耐药防控策略制定提供了关键数据支持。