整合子复合体在卡波西肉瘤相关疱疹病毒裂解复制中的关键作用

这篇研究揭示了整合子复合体（INT）在卡波西肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）裂解复制中的核心功能。通过多组学分析，作者发现INT亚基11（INTS11）作为酶活性核心，被KSHV劫持以全局调控病毒裂解期转录，同时动态影响宿主基因表达。研究填补了INT在病毒感染中作用的空白，为疱疹病毒生命周期调控提供了新视角。

　　

整合子复合体在KSHV裂解复制中的核心功能

ABSTRACT

整合子复合体（INT）作为RNA生物合成的关键调控因子，其功能在病毒感染等动态过程中尚未明确。卡波西肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）作为致癌性DNA病毒，通过裂解期基因的级联表达实现复制。研究发现INTS11的缺失会导致KSHV裂解转录组的全局抑制，揭示INT是病毒劫持宿主转录机制的关键媒介。

INTRODUCTION

INT作为动物界特有的15亚基复合物，通过RNA聚合酶II（RNA Pol II）调控转录延伸。INTS11作为催化核心，可加工snRNA和eRNA的3'端。KSHV裂解期需大量招募RNA Pol II，为研究INT在动态转录调控中的作用提供理想模型。

RESULTS

INTS11缺陷导致KSHV裂解转录全局抑制

在iSLK.219细胞模型中，siRNA敲低INTS11使裂解标志蛋白RFP表达降低90%（72 hpr）。全基因组qPCR阵列显示88%的KSHV ORF转录受抑制，包括早期（ORF57）、中期（ORF39）和晚期（K8.1）基因。核糖体RNA去除测序证实：裂解期100%的KSHV基因依赖INTS11，而宿主基因调控比例从潜伏期的30%降至裂解晚期的11%。

INTS11通过双重机制调控病毒复制

1. 基因组复制：INTS11缺失使细胞内KSHV基因组拷贝数下降4倍（72 hpr）；

2. 蛋白表达：Western blot显示病毒蛋白ORF57、vIL-6和ORF45表达量减少；

3. 病毒粒子产生：细胞外病毒基因组拷贝数降低10倍，感染性实验证实HEK293细胞的GFP⁺率下降。

阶段特异性调控模式

在潜伏期建立阶段（SLK细胞感染模型），INTS11敲除不影响LANA蛋白表达或基因组维持。但在非经典裂解性感染（iSLK.RTA模型）中，INTS11缺失使ORF57转录降低3倍，证实其对裂解途径的特异性调控。

其他INT亚基的协同作用

INTS9（催化结构域）和INTS6（PP2A招募模块）敲除同样抑制病毒复制：

• INTS9缺失使ORF57 mRNA降低2.5倍

• INTS6缺失延迟pre-U1积累至48 hpr

  复合敲除实验表明这些亚基可能存在INTS11非依赖功能。

ChIP-seq揭示基因组劫持机制

INTS11在KSHV基因组形成两个结合热点：

1. 23-32 kb区域（含Ori-L和PAN RNA）

2. 117-120 kb区域（含Ori-R和Kaposin）

   裂解晚期病毒基因组结合信号增强3倍，而宿主基因结合减少，提示资源重分配。

DISCUSSION

研究首次阐明INT被病毒选择性劫持的机制：KSHV通过RTA-ORF57-PAN复合物招募RNA Pol II，可能协同引导INTS11至病毒基因组。这种"转录劫持"模型为理解疱疹病毒与宿主互作提供新范式，其动态调控特征也为靶向INT的抗病毒策略奠定基础。

创新性发现

• 发现INT在病毒裂解期的全局正向调控作用

• 揭示KSHV通过空间竞争重分配INTS11结合位点

• 建立INT亚基功能层级模型（核心酶活＞支架＞磷酸酶模块）

该研究为RNA代谢机器在感染性疾病中的作用提供了范式转换级的认知，相关机制可能适用于其他DNA病毒。