HPV16E6与NFX1-123协同诱导角质细胞增殖性蛋白质组动态变化及其在癌前表型转化中的作用

本研究揭示了高危型HPV16E6蛋白通过宿主蛋白NFX1-123的协同作用，在长期角质细胞培养中驱动增殖性蛋白质组重塑的分子机制。通过定量蛋白质组学分析发现，NFX1-123过表达显著增强16E6介导的端粒酶活性（hTERT）及DNA修复通路（MCM2/4），导致晚期细胞生长加速和异型增生表型。该研究为HPV16阳性癌变早期事件提供了新型生物标志物和治疗靶点。

　　

ABSTRACT

高危型人乳头瘤病毒（HPV16）是宫颈癌、肛门生殖器和口咽癌的主要致病因子。尽管预防性疫苗已上市，但接种率不足导致相关癌症全球负担持续。HPV16 E6（16E6）作为关键病毒癌蛋白，虽无酶活性却通过劫持宿主蛋白网络（如NFX1-123）驱动细胞转化。研究发现NFX1-123在HPV16阳性癌组织中异常高表达，与16E6直接互作。本研究通过建立纵向角质细胞培养模型，揭示NFX1-123过表达显著增强16E6介导的端粒酶激活和DNA复制许可，最终导致细胞永生化表型。

IMPORTANCE

NFX1-123作为16E6的关键宿主搭档，其过表达通过重塑增殖性蛋白质组（827个差异蛋白）促进癌前转化。该发现为靶向HPV16阳性病变的干预策略提供了新思路。

INTRODUCTION

HPV16通过E6/E7癌蛋白破坏宿主细胞周期调控。其中16E6通过E6AP泛素连接酶降解p53，同时激活端粒酶维持端粒长度。近年研究发现NFX1-123作为新型互作蛋白，其RING结构域具有E3泛素连接酶活性，且通过PAM2/R3H结构域调控RNA稳定性。在HPV16阳性癌变过程中，NFX1-123表达水平与疾病进展正相关，但其长期作用机制尚未阐明。

RESULTS

生长动力学突破

三组独立原代角质细胞（HFK-A/B/C）实验显示，16E6/FN123细胞在晚期培养（>60天）呈现爆发式增殖：群体倍增数增加2.1-3.4倍，端粒酶活性提升6.1倍。器官型培养模型证实其上皮层增厚（P<0.005）和基底细胞核异型性等癌前特征。

蛋白质组时空演变

TMT质谱分析揭示：

• 早期阶段：16E6/vec与16E6/FN123仅22个差异蛋白

• 晚期阶段：差异蛋白激增至827个，涉及端粒维护（HSP90/CCT1-8）和DNA复制（MCM2-7）通路

• 关键发现：MCM4在HFK-C晚期表达上调275倍，Western blot验证该趋势跨细胞系存在

端粒稳态重编程

16E6/FN123细胞中，分子伴侣TRiC/CCT复合物（CCT1-8）协同HSP90促进hTERT核转位，形成功能性端粒酶复合体。这与临床观察到的HPV相关癌症端粒酶持续激活现象高度吻合。

DNA复制机器激活

MCM解旋酶家族（尤其MCM2/4）在晚期16E6/FN123细胞中特异性富集，其过表达与宫颈癌组织检测结果一致。这些蛋白构成DNA复制前复合体（pre-RC），为细胞无限增殖提供分子基础。

DISCUSSION

NFX1-123通过三重机制协同16E6致癌：

1. 转录后调控：PAM2/R3H结构域稳定hTERT和MCM mRNA

2. 蛋白稳态控制：RING结构域参与靶蛋白泛素化降解

3. 时空特异性：效应随培养时间逐渐增强，模拟临床癌变进程

该研究首次系统描绘HPV16E6/NFX1-123轴驱动的蛋白质组动态图谱，为开发针对HPV阳性癌前病变的精准干预策略奠定理论基础。

MATERIALS AND METHODS

实验采用原代角质细胞三维培养系统，结合TMT标记定量蛋白质组学（Exploris 480质谱仪，FAIMSpro接口）。数据分析采用STRING-DB通路富集，显著性阈值设定为P<0.05。端粒酶活性通过TRAPeze试剂盒检测，统计采用GraphPad Prism 10.4.1完成。