Ag85B-Rv2660c-MPT70融合蛋白治疗性疫苗接种增强暴露后小鼠结核分枝杆菌H37Ra清除效果

本研究创新性开发了结核分枝杆菌（Mtb）多抗原融合蛋白ARM（Ag85B-Rv2660c-MPT70），在暴露后小鼠模型中证实其通过协同激活Th1型细胞免疫（IFN-γ+/TNF-α+多功能T细胞）和体液免疫（FcγR依赖性吞噬作用），显著优于BCG疫苗的病原清除能力（肺组织CFU降低1.5 log10）和病理修复效果，为结核病（TB）暴露后干预提供了新型免疫治疗策略。

　　

1 引言

结核病（TB）作为全球最致命的单一传染病源，每年导致超百万人死亡。尽管现有化疗方案有效，但耐药性、毒副作用和患者依从性等问题促使研究者探索新型免疫干预策略。ARM融合蛋白的创新设计整合了三种关键抗原：分泌蛋白Ag85B（诱导Th1/B细胞应答）、休眠期高表达的Rv2660c（激活CD4⁺/CD8⁺T细胞）和膜蛋白MPT70（触发抗体依赖性吞噬），这种多靶点协同作用为突破传统疫苗局限提供了可能。

2 材料与方法

研究采用C57BL/6小鼠静脉接种H37Ra（10⁷ CFU）建立感染模型，28天后分组接受ARM（10μg+CpG佐剂）、BCG（10⁶ CFU）或PBS处理。通过流式细胞术检测肺脾组织CD44⁺T细胞亚群，ELISA定量血清IgG/IgM，并创新性构建H37Ra-eGFP菌株进行吞噬-溶酶体融合可视化分析。

3 结果

3.1 病原清除与病理改善

ARM组在56天时肺组织菌载量（2.8 log₁₀ CFU）显著低于BCG组（4.3 log₁₀），且体重恢复至感染前102%。病理评分显示ARM组肺泡结构破坏评分（1.2±0.3）仅为BCG组（2.1±0.4）的57%。

3.2 免疫应答特征

流式分析揭示ARM诱导的CD4⁺T细胞中，三重细胞因子生产者（IFN-γ⁺TNF-α⁺IL-2⁺）占比达18.7%，是BCG组（6.3%）的3倍。血清学检测显示ARM特异性IgG滴度在49天达1:12,800，介导的吞噬效率（MFI 2,450）较BCG血清（MFI 1,120）提升119%。

3.3 机制解析

共聚焦显微镜显示ARM血清处理的巨噬细胞中，H37Ra-eGFP与溶酶体共定位率达73.5%，显著高于BCG组（41.2%）。生长抑制实验证实ARM血清使细菌日增长率降至0.08，较PBS组（0.35）降低77%。

4 讨论

该研究首次阐明ARM通过"双管齐下"机制发挥作用：一方面通过Ag85B-Rv2660c轴激活多克隆T细胞风暴，另一方面借助MPT70诱导的IgG2c抗体促进FcγRIII依赖性吞噬溶酶体成熟。值得注意的是，ARM诱导的抗体对H37Rv全细胞裂解物的交叉反应提示其可能针对保守表位，这为广谱疫苗设计提供新思路。

5 局限与展望

当前H37Ra模型虽证实概念，但需在 aerosol 感染模型中验证；ARM组分间的协同机制需通过单抗原剔除实验进一步解析。未来可探索与异烟肼的联用方案，或改造为mRNA疫苗增强黏膜免疫应答。

（注：全文严格基于原文数据，未添加非文献支持内容，专业术语均保留原始大小写和符号格式）