综述：长新冠中的微小RNA：作用、诊断生物标志物潜力及检测

这篇综述深入探讨了微小RNA（miRNA）在长新冠（Long COVID）中的调控作用及其作为诊断生物标志物的潜力。文章系统梳理了miRNA在免疫失调（immune dysregulation）、慢性炎症（chronic inflammation）和多器官损伤中的关键功能，重点介绍了纳米孔测序技术（Oxford Nanopore Sequencing, ONS）在保留RNA天然修饰方面的技术优势。作者团队来自罗马尼亚多所医学院校，通过整合多组学数据，为长新冠的分子机制研究和临床诊断提供了新视角。

　　

长新冠中的微小RNA调控网络

长新冠（Long COVID）作为SARS-CoV-2感染后的长期后遗症，其特征是持续数周至数月的多系统症状。最新研究表明，微小RNA（miRNA）这种长度约22-24个核苷酸的非编码RNA分子，在长新冠的发病机制中扮演着核心调控角色。

miRNA的生物合成与功能

miRNA的生物合成始于细胞核内RNA聚合酶II/III的转录，经Drosha酶加工形成pri-miRNA，再通过Dicer酶剪切为pre-miRNA，最终形成成熟miRNA。这些分子通过与Argonaute蛋白（Ago2）和RNA诱导沉默复合体（RISC）结合，实现基因表达的转录后调控。值得注意的是，miRNA具有惊人的稳定性，即使在细胞外环境中也能抵抗RNase的降解，这使其成为理想的生物标志物候选者。

COVID-19中的miRNA特征谱

在急性SARS-CoV-2感染阶段，多项研究通过RT-PCR和测序技术发现了特征性的miRNA表达谱。例如：

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  显著上调的miR-155通过抑制AGTR1基因，减轻血管紧张素II诱导的心脏肥大

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  miR-146a-5p作为TLR信号通路的关键调节因子，在重症患者中表达升高3.2倍

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  miR-21通过TGF-β1/Smad-3通路促进肺纤维化

  这些异常表达的miRNA不仅参与病毒入侵（如调控ACE2和TMPRSS2表达），还影响免疫应答和器官损伤进程。

长新冠的miRNA调控机制

神经系统的持续症状

约31-44%的长新冠患者报告认知功能障碍，这与中枢神经系统中持续存在的病毒RNA相关。研究发现：

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  miR-124通过抑制SCP1促进神经元分化

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  miR-9调控STAT3信号通路减轻神经炎症

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  脑脊液中miR-224-5p水平与认知障碍严重程度呈负相关

心血管并发症

心脏受累表现为心肌炎、心律失常和内皮功能障碍：

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  miR-21通过抑制SPRY1/PTEN促进心肌纤维化

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  miR-29b-3p上调DNMT3A加剧病毒性心肌炎

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  miR-126下调导致血管完整性破坏

肺纤维化发展

持续存在的病毒抗原引发慢性炎症：

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  miR-21/miR-200激活TGF-β1/Smad通路

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  miR-29家族抑制PI3K/Akt/mTOR信号

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  这些变化导致肺泡上皮间质转化（EMT）

胃肠与肾脏病变

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  粪便中miR-223通过抑制NLRP3炎症小体调节肠道免疫平衡

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  尿液中miR-192/miR-215反映肾小管上皮损伤

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  miR-29家族缺失导致肾间质纤维化

检测技术进展

传统方法如RT-PCR和Illumina测序虽灵敏度高，但存在扩增偏倚和无法检测RNA修饰的局限。牛津纳米孔测序（ONS）技术展现出独特优势：

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  实时、长读长、无需扩增

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  保留RNA天然修饰（如m⁶A）

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  直接检测miRNA异构体（isomiR）

  尽管当前单碱基准确度约85-88%，但SR-Cat-Seq等新方法已将错误率降至3.4%

标准化与临床应用挑战

样本前处理标准化：

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  EDTA抗凝血浆优于肝素管

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  冻存温度需低于-80℃

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  冻融循环不超过4次

数据分析挑战：

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  NormFinder算法优化内参选择（推荐miR-191/miR-103）

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  时序多组学整合工具TimiRGeN解析调控网络

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  需考虑性别差异（女性XIST表达升高2.1倍）

未来展望

研究者建议从五个方向突破：

1. 1.

   建立跨平台检测标准

2. 2.

   开发AI辅助的生物标志物组合优化模型

3. 3.

   开展时序多组学研究

4. 4.

   探索基于miRNA的亚型分类

5. 5.

   推动便携式纳米孔检测设备临床转化

通过整合miRNA组、转录组和蛋白质组数据，将有助于揭示长新冠的分子分型机制，并为个体化治疗提供新靶点。