长链非编码RNA HNF4A-AS1通过上调TLE4抑制乙型肝炎病毒复制的机制研究

为解决乙型肝炎病毒（HBV）复制调控机制不明的问题，研究人员聚焦长链非编码RNA（lncRNA）HNF4A-AS1在HBV感染中的作用。通过体外实验和转录组分析，发现HNF4A-AS1通过上调转录抑制因子TLE4抑制HBV EnhII/Cp活性，从而阻断病毒转录与复制。该研究揭示了宿主lncRNA与HBV的新型互作机制，为靶向cccDNA（共价闭合环状DNA）的HBV治疗策略提供了潜在靶点。

　　

乙型肝炎病毒（HBV）感染是全球公共卫生重大挑战，全球约2.96亿人患有慢性HBV感染，每年导致近100万例肝硬化或肝癌死亡。现有疗法如干扰素和核苷类似物仅能使不足3%的患者实现功能性治愈，核心难点在于病毒基因组cccDNA的持久性和现有手段对其转录调控机制的认知不足。近年研究发现，长链非编码RNA（lncRNA）在病毒-宿主互作中扮演关键角色，但多数lncRNA在HBV复制中的作用仍属未知。

江南大学附属中心医院（无锡市第二人民医院）临床检验科的研究团队在《Virus Research》发表的研究中，首次揭示了lncRNA HNF4A-AS1通过调控宿主因子TLE4抑制HBV复制的分子机制。研究人员结合生物信息学分析与体外实验，发现HBV感染会下调肝细胞内HNF4A-AS1表达，而该lncRNA可通过增强TLE4的转录活性，特异性抑制HBV EnhII/Cp启动子驱动的病毒基因转录。这一发现不仅揭示了病毒逃逸宿主防御的新策略，也为开发靶向cccDNA表观调控的新型抗病毒药物提供了理论依据。

研究采用的主要技术包括：1）基于GSE83148和TCGA-LIHC数据库的转录组分析；2）HBV感染细胞模型（HepG2.2.15和HepAD38）构建；3）双荧光素酶报告基因检测启动子活性；4）mRNA测序（mRNA-seq）与基因集富集分析（GSEA）；5）HBV cccDNA和核心DNA（core DNA）的Hirt提取与定量PCR检测。

HNF4A-AS1在HBV感染中被下调

通过分析慢性HBV感染者肝组织转录组数据，发现HNF4A-AS1在感染组显著下调，且与肝功能指标相关。体外实验证实HBx蛋白可激活HNF4A-AS1启动子，而HBp、HBs和HBc蛋白则表现出抑制作用，提示病毒通过多蛋白协同调控宿主lncRNA表达。

HNF4A-AS1抑制HBV复制

在Huh7和HepG2.2.15细胞模型中，过表达HNF4A-AS1使上清HBsAg水平降低50%，细胞内HBV 3.5 kb RNA和core DNA减少60%；相反，敲除该lncRNA可显著增强病毒复制。值得注意的是，cccDNA水平未受影响，表明其作用靶点为转录而非病毒基因组稳定性。

TLE4介导抗病毒效应

mRNA-seq筛选发现TLE4是HNF4A-AS1的关键下游靶标。机制上，HNF4A-AS1通过增强TLE4启动子活性上调其表达，而TLE4的WD-repeat结构域（含色氨酸-天冬氨酸重复基序）对其抑制HBV EnhII/Cp活性至关重要。截断实验显示缺失WD结构域的TLE4突变体完全丧失抗病毒功能。

这项研究首次阐明HNF4A-AS1-TLE4轴在HBV复制中的负调控作用，揭示了病毒通过下调宿主lncRNA逃逸免疫监视的新机制。从转化医学角度看，靶向激活HNF4A-AS1表达或模拟TLE4功能的小分子化合物，有望成为清除cccDNA的潜在策略。该成果为理解lncRNA在病原体-宿主互作中的普适性规律提供了重要范式。