长链非编码RNA Snhg18通过调控Yap亚细胞定位维持骨稳态的机制研究

本研究针对骨质疏松治疗中骨量恢复困难的临床难题，发现lnc-Snhg18通过结合Cav1和Ywhah蛋白促进Yap核转位，显著改善BMSCs成骨分化能力。同济大学附属口腔医院团队采用单细胞测序、RNA pull-down等技术，证实lnc-Snhg18在LepR+ MSC中特异性高表达，其AAV递送系统可有效逆转卵巢切除和废用性骨质疏松模型的骨丢失，为靶向RNA治疗骨质疏松提供了新策略。

　　

骨质疏松症作为全球性健康难题，现有疗法虽能延缓骨量流失，却难以有效恢复已丢失的骨质。这一治疗瓶颈的核心在于骨髓间充质干细胞（BMSCs）的成骨分化障碍——当机械信号传导关键效应分子Yap（Yes-associated protein）被困在细胞质时，骨形成能力便会显著下降。尽管学界已知细胞外基质硬度下降、氧化应激等因素会干扰Yap的核定位，但如何精准调控这一过程仍是未解之谜。

同济大学附属口腔医院Jie Huang、Yuteng Weng等研究者将目光投向具有细胞类型特异性的长链非编码RNA（lncRNA）。通过整合单细胞转录组和骨质疏松模型数据，团队锁定了一个在LepR⁺ MSC（瘦素受体阳性间充质干细胞）中富集的功能保守分子——lnc-Snhg18。这项发表于《Nature Communications》的研究揭示，该分子如同"分子开关"般通过重塑蛋白互作网络激活Yap信号，为骨质疏松治疗提供了全新靶点。

研究团队运用多组学联分析、RNA-蛋白互作验证、转基因动物模型等关键技术。从人类颌骨手术标本中分离BMSCs进行功能验证，建立卵巢切除（OVX）和下颌骨卸载小鼠模型模拟两类骨质疏松，采用AAV9载体实现骨组织特异性基因递送。通过单细胞RNA测序解析细胞异质性，结合RNA pull-down与质谱技术鉴定关键结合蛋白。

Snhg18在LepR⁺ MSC和成骨细胞中反映骨状态

分析人类MSC成骨分化数据集与小鼠骨质疏松模型数据交叉筛选出5个保守ncRNA，其中lnc-Snhg18在成骨诱导时上调而在OVX模型中下调。时空表达分析显示其在骨折修复第7天达峰，与成骨关键转录因子Sp7共聚类。单细胞转录组揭示其特异性富集于LepR⁺ MSC亚群，该群体是成骨祖细胞的主要来源。

Snhg18/SNHG18增强BMSCs成骨分化

伪时序分析显示lnc-Snhg18随成骨分化进程持续升高。功能实验证实其敲除导致碱性磷酸酶活性下降70%，而过表达使钙结节形成增加2.3倍。基因集富集分析（GSEA）揭示其调控细胞外基质重构通路，Masson染色显示胶原纤维排列紊乱与其表达水平直接相关。

Snhg18直接结合Cav1和Ywhah增强相互作用

RNA pull-down联合质谱鉴定出14-3-3 eta蛋白（Ywhah）和小窝蛋白1（Cav1）为关键结合伴侣。电泳迁移实验（EMSA）证实三者结合依赖lnc-Snhg18的茎环结构，突变体结合能力丧失80%。共免疫沉淀显示lnc-Snhg18使Cav1-Ywhah结合增强3.5倍，为后续机制奠定基础。

Snhg18促进Ywhah-Yap解离和Yap核转位

活细胞成像显示敲除组Yap-EGFP核质比下降58%。组织Co-IP证实lnc-Snhg18过表达使Ywhah-Yap相互作用减弱65%，同时促进Yap去磷酸化。机制上，lnc-Snhg18作为"分子支架"促进Cav1竞争性结合Ywhah，释放被扣押的Yap进入核内激活成骨基因。

Snhg18敲除损害骨稳态和Yap定位

LepR-Cre条件性敲除小鼠12周龄时骨小梁厚度（Tb.Th）减少31%，废用性骨质疏松模型中骨质流失加剧2.1倍。免疫荧光显示敲除组Yap核定位率从72%降至29%，尤其在机械卸载条件下更为显著。颅骨缺损模型显示修复延迟，胶原纤维排列紊乱。

Snhg18递送逆转骨质疏松

AAV9介导的lnc-Snhg18治疗使OVX小鼠骨体积分数（BV/TV）恢复至 sham组85%，双标荧光显示骨形成率提升2.8倍。在颌骨卸载模型中，治疗组Yap核转位比例从21%回升至63%，证实其跨模型治疗潜力。

该研究不仅阐明lnc-Snhg18-Cav1-Ywhah-Yap轴在骨稳态中的核心地位，更开创性地提出：靶向LepR⁺ MSC的lncRNA递送策略可突破现有骨质疏松治疗的局限性。相较于传统抗吸收药物，这种通过恢复干细胞力学感知能力促进骨再生的方法，为老年性、激素性和废用性骨质疏松的联合治疗提供了新范式。值得注意的是，研究者发现随着年龄增长，机体可能通过增加基质刚度等代偿机制部分弥补lnc-Snhg18缺失的影响，这提示联合靶向机械微环境与分子通路可能获得更佳疗效。未来研究需优化AAV递送效率，并探索lnc-Snhg18保守结构域的药物开发价值。