高通量活病毒微量中和试验提升流感疫苗接种反应的分辨率

这篇研究通过开发高通量活病毒微量中和试验(LV-N)，与传统血凝抑制试验(HAI)进行头对头比较，证实了LV-N在评估65岁以上人群流感疫苗免疫反应中的优越性。该方法具有更高通量(~1000-1500份血清/周)和更精细的分辨率(IC50定量范围40-40,000)，能更准确检测抗体水平变化(d7/d0和d181/d7)及预存抗体的抑制作用，为疫苗评价和系统疫苗学研究提供了新工具。

　　

ABSTRACT

流感仍是人类健康的重大威胁。传统血凝抑制试验(HAI)自1940年代沿用至今，本研究将SARS-CoV-2高通量活病毒微量中和试验(LV-N)改造用于流感病毒，在73名65岁以上社区老年人中比较了两种方法对2021-22北半球四价疫苗的评估效果。

1 Introduction

全球每年约38.9万人死于流感。当前HAI试验虽可规模化但分辨率有限，不能直接测量中和抗体。本研究开发的LV-N试验每周可处理4500份样本，为疫苗株选择、平台比较和系统疫苗学提供新方案。

2 Methods

2.1 研究设计

AgeVax研究纳入73名携带特定HLA等位基因的老年人，采集接种前(d-82至d-5)、接种后7天(d6-10)和181天(d156-200)的血清。使用含A(H3N2)、A(H1N1)pdm09、B/Yamagata和B/Victoria株的四价疫苗。

2.3-2.4 检测方法

HAI试验使用豚鼠/火鸡红细胞，LV-N试验采用MDCK-SIAT1细胞384孔板培养，通过荧光染色定量病毒核蛋白(NP)计算IC₅₀。数据用R语言分析，采用Spearman相关和Wilcoxon检验。

3 Results

两种方法均检测到疫苗接种后的抗体升高(d7 vs d0，p<0.015)。LV-N显示更显著的抗体衰减(d181/d7)：对B/Yamagata系(p=0.004)的衰减HAI未能检出(p=0.16)。群体水平相关性良好(Spearman系数0.49-0.88)，但单个HAI值(如20)对应的LV-N值跨度达23倍(43-1004)。LV-N能更灵敏反映预存抗体对疫苗反应的抑制作用(所有株系p<0.009)。

4 Discussion

LV-N优势体现在：1)通量高(每周数千份样本)；2)连续定量IC₅₀避免HAI的离散化误差；3)能检测HA2和神经氨酸酶(NA)的中和抗体。局限性包括主要评估记忆反应，且未与其他中和试验方法直接比较。

5 Conclusion

高通量LV-N在保持与HAI相关性的同时，提供了更精细的疫苗反应评估，有望革新年度疫苗株选择、新疫苗评价和系统疫苗学研究，成为大流行防范的重要工具。

Author Contributions

多学科团队完成本研究，包括剑桥大学医院、弗朗西斯·克里克研究所等机构。资助来自英国MRC、NIHR、惠康信托等。

Acknowledgements

感谢NIHR剑桥生物资源中心志愿者和工作人员。特别致谢弗朗西斯·克里克研究所的技术支持团队。

Conflicts of Interest

除M.A.L.参与GSK免疫学网络外，其他作者声明无利益冲突。