双硫仑通过抑制GSDMD介导的细胞焦亡对重症急性胰腺炎小鼠多器官损伤的保护作用及机制研究

《Journal of Cellular and Molecular Medicine》：Disulfiram Protects Against Multiorgan Injuries and Cell Pyroptosis via Inhibiting GSDMD in Severe Acute Pancreatitis Mice

这篇研究揭示了双硫仑(DSF)通过抑制Gasdermin D(GSDMD)介导的细胞焦亡(pyroptosis)，显著改善重症急性胰腺炎(SAP)小鼠胰腺组织坏死、炎症浸润及多器官(肺/肝/肾)损伤。研究证实DSF能下调GSDMD-FL/GSDMD-N表达，抑制NF-κB p65磷酸化(p-NF-κB p65)，降低乳酸脱氢酶(LDH)释放和促炎因子(IL-1β/IL-18等)mRNA水平，为SAP及其相关多器官衰竭(MOF)提供了新型治疗策略。

　　

引言

急性胰腺炎(AP)进展为重症急性胰腺炎(SAP)时，胰蛋白酶异常激活引发的全身炎症反应可导致多器官衰竭(MOF)。近年研究发现，Gasdermin D(GSDMD)介导的细胞焦亡(pyroptosis)是程序性细胞死亡的新形式，其特征性膜孔形成会释放IL-1β、IL-18等促炎因子。双硫仑(DSF)作为FDA批准的戒酒药，近期被发现可抑制GSDMD切割，但其在SAP-MOF中的作用机制尚未明确。

材料与方法

研究采用C57BL/6小鼠构建SAP模型：通过8次腹腔注射雨蛙素(caerulein, 50μg/kg)联合LPS(10mg/kg)诱导，并设置DSF预处理和治疗组。通过HE染色评估胰腺/肺/肝/肾病理损伤，SYTOX Green染色检测细胞死亡，ELISA和qPCR分析炎症因子，Western blot检测GSDMD-FL、GSDMD-N及p-NF-κB p65蛋白表达。

结果

多器官保护效应：DSF显著改善胰腺腺泡细胞空泡化、肺水肿及肝肾炎性浸润。病理评分显示DSF使血清淀粉酶(AMY)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)和尿素氮(BUN)水平降低50%以上，F4/80⁺巨噬细胞浸润减少70%。

抑制胰腺焦亡：DSF组SYTOX⁺死亡细胞数下降65%，LDH释放减少60%。Western blot显示GSDMD-N表达量降低3倍，p-NF-κB p65磷酸化水平下降55%。qPCR证实IL-1β、IL-6、TNF-α等mRNA表达被显著抑制。

远端器官调控：在肺组织中，DSF使肺泡塌陷面积减少80%，肝组织SYTOX⁺细胞降低58%，肾组织CCL2 mRNA表达下调72%。

讨论

研究首次阐明DSF通过三重机制缓解SAP-MOF：

1. 1.

   直接抑制GSDMD切割，阻断焦亡执行阶段

2. 2.

   下调NF-κB信号通路，减少促炎因子风暴

3. 3.

   维持细胞膜完整性，降低LDH等损伤标志物

特别值得注意的是，DSF对已形成的器官损伤仍有修复作用，其治疗后组胰腺病理评分仍较SAP组降低40%。

结论

该研究不仅证实GSDMD介导的焦亡是SAP-MOF的关键病理机制，更为临床转化提供新思路——老药新用的DSF可通过多靶点干预成为SAP的潜在治疗药物，其抑制"焦亡-炎症"恶性循环的特性对脓毒症等全身炎症疾病也有借鉴意义。