基于血浆细胞外囊泡浓度识别缺血性脑卒中患者的生物标志物研究

本研究针对急诊室中难以快速区分缺血性脑卒中与其他类似症状患者的临床难题，通过流式细胞术检测155例患者血浆中细胞外囊泡(EVs)亚型浓度。研究发现，缺血性脑卒中患者活化血小板EVs(CD62p+)和白细胞EVs(CD45+)浓度显著降低，结合舒张压(DBP)可独立预测缺血性脑卒中(AUC 0.61)。该成果为急诊场景下快速鉴别卒中类型提供了新型液体活检策略。

　　

在急诊室里，每分每秒都在上演着与死神赛跑的剧情。当患者突然出现口角歪斜、肢体无力等卒中症状时，医生面临的第一个生死抉择就是：这是血管堵塞引起的缺血性脑卒中，还是血管破裂导致的出血性脑卒中？这两种截然不同的病因需要完全相反的治疗方案——前者需要紧急溶栓，后者则需控制出血。但现有的CT检查不仅耗时，在救护车等院前场景更无法实施。这种"诊断时间窗"的困境，每年导致全球数百万患者错过黄金救治时机。

阿姆斯特丹大学医学中心(Amsterdam UMC)的实验临床化学实验室联合神经内科、生物医学工程等多学科团队，开展了一项名为CINTICS的突破性研究。研究人员另辟蹊径，将目光投向血液中纳米级的细胞外囊泡(EVs)——这些由细胞主动释放的膜包被颗粒，如同分子邮差般实时反映着人体的病理状态。通过高精度流式细胞术分析155例急诊患者的血浆样本，他们首次发现缺血性脑卒中患者存在独特的EVs"指纹"：活化血小板来源的CD62p⁺ EVs和白细胞来源的CD45⁺ EVs浓度分别较其他诊断患者降低34%和29%。当这两个指标与患者舒张压(DBP>82 mmHg)组合时，识别缺血性脑卒中的准确率显著提升。这项发表于《Translational Stroke Research》的研究，为开发院前快速诊断工具提供了全新靶点。

关键技术方法：研究团队采用标准化的双离心法制备血浆样本，使用配备Rosetta校准系统的Northern Lights流式细胞仪(Cytek Biosciences)检测EVs，检测限设定为100-1000 nm颗粒，通过CD41、CD62p、CD45等表面标志物区分EVs亚群，并采用MESF(等效可溶性荧光分子数)标准化荧光信号。所有操作遵循MIFlowCyt-EV报告规范。

主要研究结果：

1. 1.

   患者特征差异：66例缺血性脑卒中患者平均年龄(69.6岁)显著高于其他89例患者，且舒张压更高(93 vs 87 mmHg)。

2. 2.

   EVs浓度特征：缺血组CD62p⁺ EVs浓度中位数2.0×10⁵/mL，显著低于非缺血组的3.0×10⁵/mL；CD45⁺ EVs浓度在缺血组为6.5×10⁶/mL，非缺血组达9.8×10⁶/mL。

   
3. 3.

   诊断效能：CD45⁺ EVs浓度<7.71×10⁶/mL时，对缺血性脑卒中的特异性达67%；结合DBP>82 mmHg后，诊断OR值提升至3.98。

4. 4.

   亚组分析：大血管闭塞(LVO)患者CD45⁺ EVs降低更显著，而蛛网膜下腔出血患者血小板EVs(CD41⁺)浓度异常升高。

讨论与意义：该研究首次在真实临床场景中证实，循环EVs的动态变化与缺血性脑卒中的病理过程密切相关。研究者提出创新性假说：血栓形成过程中，活化血小板和白细胞释放的EVs可能大量滞留在病变血管壁，导致外周血中检测值降低。这一发现突破了既往认为血栓性疾病必然伴随EVs升高的传统认知。虽然当前流式检测技术尚难满足急诊即时检测需求，但正在推进的PHOREVER项目计划开发集成化检测芯片，有望将这项实验室发现转化为床旁诊断工具。更重要的是，该研究建立的标准化检测流程(MIFlowCyt-EV)为EVs生物标志物研究提供了可重复性范本，解决了该领域长期存在的检测方法不统一、结果不可比等痛点。未来扩大样本量后，这种"EVs指纹"策略或可延伸应用于其他血栓性疾病的早期预警。