基于重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条(RPA-LFD)技术的绵羊粪便中莫尼茨绦虫快速可视化检测

本研究创新性地开发了基于β-微管蛋白基因(MTUB)的重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条(RPA-LFD)检测方法，可在39℃条件下15分钟内完成对绵羊粪便中莫尼茨绦虫(Moniezia spp.)的可视化检测。该方法具有10 copies/μL质粒DNA的检测灵敏度，与PCR检测一致性达95.7%(K=0.939)，为牧场现场筛查提供了便携高效的诊断工具。

　　

亮点

• 首次建立针对Moniezia的RPA-LFD可视化检测体系

• 优化反应条件为39℃/15分钟，引物-探针比例4:0.6

• 检测限达10 copies/μL质粒DNA或10 pg/μL基因组DNA

• 与PCR检测结果高度一致(Kappa=0.939)

讨论

分子诊断技术因其高特异性和灵敏度正日益受到寄生虫学家青睐。在众多核酸检测方法中，RPA-LFD凭借卓越的便携性脱颖而出，特别适合在资源有限地区开展大规模寄生虫筛查。本研究所建立的检测体系不仅能准确区分M. expansa和M. benedeni，对其它常见胃肠道寄生虫（如Fasciola hepatica）也无交叉反应。值得注意的是，该方法操作简便，无需专业设备，即使非专业人员经过简单培训也能在20分钟内完成从核酸扩增到结果判读的全流程。

结论

本研究成功开发了基于MTUB基因的RPA-LFD检测技术，为绵羊莫尼茨绦虫病的现场筛查提供了快速（<20分钟）、可视化且可靠的解决方案。该技术特别适用于牧区现场和偏远地区的常规监测，有望显著提升寄生虫防控效率。