基于ITS序列的物种特异性PCR技术在柴胡药材及其常见伪品鉴定中的应用研究

本研究通过开发靶向ITS区的物种特异性PCR技术，成功实现了《中国药典》正品柴胡（北柴胡Bupleurum chinense和南柴胡B. scorzonerifolium）与常见伪品（窄竹叶柴胡B. marginatum var. stenophyllum及锥叶柴胡B. bicaule）的精准鉴别。该方法可检出低至0.1 ng/μL的DNA模板，对人工掺伪样品仍保持强大分辨力，为中药材质量控制提供了分子检测新工具。

　　

Highlight

材料

为筛选精准的物种特异性引物，本研究从黑龙江省药品检验研究院标本馆获取了16批样本，包括正品柴胡（B. chinense和B. scorzonerifolium）及伪品（B. marginatum var. stenophyllum和B. bicaule）。另从全国药材市场收集32批商品样本，经形态学鉴定确证其基原。

基于ITS标记的柴胡与伪品单核苷酸多态性(SNP)位点研究

通过分析NCBI数据库308条ITS序列（涵盖4个物种），发现B. chinense存在16种变异型，B. scorzonerifolium有3种，而两个伪品物种均呈现高度序列保守性。DNAMAN软件比对揭示了可用于引物设计的特异性SNP位点，为建立分子鉴别方法奠定基础。

讨论

中药材掺伪问题严重影响临床疗效标准化。本研究所建PCR法对B. chinense的检测灵敏度较B. scorzonerifolium高30倍，提示该方法在市场监管中具有差异化识别优势。特别值得注意的是，该技术能识别正品主导的掺伪样本，突破了传统方法的技术瓶颈。

结论

本研究首次建立可同步鉴别2种正品柴胡和2种常见伪品的物种特异性PCR技术。该方法为中药材生产标准化提供了分子监控工具，其175-272bp的清晰条带判读体系尤其适合基层检测机构推广应用。

第二个Conclusion

（注：根据用户要求，此处保留小标题但不再重复翻译相同内容）