奶牛粪便中空肠弯曲菌和猪肠弯曲菌培养检测方法的比较研究及其在食品安全中的意义

本研究通过系统比较六种培养方法（Preston/Bolton富集 broth 结合 mCCDA/Preston 选择性培养基）在奶牛粪便样本中对空肠弯曲菌(C. jejuni)和猪肠弯曲菌(C. hyointestinalis)的检测效能，发现Bolton broth富集使C. hyointestinalis检出率提升3000倍(OR=3,075)，而Preston broth对C. jejuni检测更优(OR=8.52)。研究首次证实非耐热型C. hyointestinalis在牛群中的高流行率(94.4%)，为完善食源性病原体监测标准提供了关键方法学依据。

　　

ABSTRACT

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)和猪肠弯曲菌(C. hyointestinalis)是人类胃肠炎的重要病原体。本研究在瑞典某商业化奶牛场对18头荷斯坦奶牛进行纵向采样（2024年6-8月，4个时间点），系统评估了六种培养方法组合：直接培养（mCCDA/Preston agar）与富集培养（Preston/Bolton broth + mCCDA/Preston agar），所有培养均在37°C微需氧条件下进行以支持非耐热菌株生长。

INTRODUCTION

弯曲菌属作为微需氧革兰阴性菌，其耐热型（如C. jejuni/C. coli）是食源性疾病主要致病原，而非耐热型（如C. hyointestinalis）在反刍动物中普遍存在但常被标准方法（ISO 10272）忽略。既往研究显示牛群中弯曲菌检出率差异巨大（0-83%），主要归因于方法学差异——法国两项研究分别报告69.1%（Preston富集）和16.5%（直接培养）的检出率差异。

MATERIALS AND METHODS

样本采集自泌乳期<100天的奶牛直肠，采用MALDI-TOF MS进行菌种鉴定。统计模型显示：对于C. hyointestinalis，Bolton broth富集使检出优势比激增至3,075倍（95%CI: 272-34,651），且与Preston agar存在显著交互作用（P=0.012）；而C. jejuni在Preston broth中检出优势比为8.52（95%CI: 3.16-22.9）。值得注意的是，直接培养仅检出5份C. hyointestinalis阳性样本，凸显富集培养的关键作用。

RESULTS

时序分析显示：C. jejuni检出率从首轮66.7%降至末轮41.2%（P=0.07），而C. hyointestinalis始终保持高流行（77.8-94.4%）。除目标菌外，同时检出乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)和库德里阿兹威氏毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)等共生菌。

DISCUSSION

本研究首次揭示C. hyointestinalis在牛群中的真实流行率可能被严重低估——标准方法（41.5°C）会漏检该菌，而37°C培养结合Bolton富集可显著提升检出率。方法学比较表明：检测C. hyointestinalis需优先选择Bolton broth + Preston agar组合，而C. jejuni适用Preston broth + mCCDA方案。这些发现对完善食源性病原体监测体系具有重要实践意义，建议在常规监测中增加非耐热弯曲菌的检测流程。

ACKNOWLEDGMENTS

感谢瑞典畜牧研究中心的技术支持，本研究受SLU Future One Health（项目号SLU.ua.2023.1.1.1-2322/4357）和瑞典皇家农林科学院（GFS2023-0155）资助。