实时荧光定量PCR（TaqMan法）筛查结核病疑似病例的临床价值：基于伊朗东北部地区的诊断效能研究

针对传统结核病诊断方法（涂片镜检和培养）灵敏度不足的问题，伊朗研究团队通过建立实验室自建实时荧光定量PCR（qPCR）技术，对307例涂片/培养阴性但临床高度怀疑的病例进行检测，发现13.55%的漏诊率，尤其在尿液样本中漏诊率高达30%。该研究证实qPCR可显著提升结核分枝杆菌（M.tb）检出率，为资源有限地区提供经济高效的分子诊断方案。

结核病（TB）作为全球最致命的传染病之一，每年导致数百万人感染。尽管已有百年防治历史，但诊断技术瓶颈始终是防控的关键短板——传统涂片镜检（ZN法）灵敏度不足50%，而金标准培养法需耗时2-8周，导致大量患者错失最佳治疗时机。更严峻的是，在免疫抑制人群和贫困地区，漏诊可能引发多重耐药（MDR）和广泛耐药（XDR）菌株的扩散。

针对这一临床痛点，马什哈德医科大学（Mashhad University of Medical Sciences）附属血液传播感染研究中心的Sanaz Ahmadi Ghezeldasht团队开展了一项突破性研究。研究人员创新性地采用实验室自建实时荧光定量PCR（qPCR）技术，以结核分枝杆菌（M.tb）特异性插入序列IS6110为靶点，对伊朗东北部地区307例涂片/培养双阴性但临床高度怀疑的病例进行筛查，相关成果发表在《Journal of Infection and Public Health》。

研究采用三大关键技术：1）基于TaqMan探针的qPCR检测体系（Rotor-Gene Q-6000平台）；2）多类型临床样本处理（含痰液、脑脊液等7类标本）；3）参照WHO标准建立双盲对照（21例培养阳性样本作为阳性对照）。通过标准化核酸提取和扩增程序，确保方法学可靠性。

【结果】

1. 1.

   诊断效能验证：qPCR在阳性对照组检出率达100%，特异性83.7%。在307例传统方法阴性样本中，意外检出50例阳性（13.55%），其中尿液样本漏诊率最高（30%）。

2. 2.

   样本类型差异：肺外标本表现突出，6例眼房水样本经qPCR检出阳性，而传统方法全部漏诊。值得注意的是，1例福尔马林固定石蜡包埋组织成功检出，突破培养法技术限制。

3. 3.

   技术优势量化：在53例痰标本中，qPCR额外检出9例阳性（17%增幅）；对于61例培养失败样本，仍检出1例阳性，证实该方法对降解样本的检测能力。

【结论与意义】

该研究首次系统评估了自建qPCR在资源有限地区的应用价值。相比商业试剂盒，采用标准试剂的自建体系成本降低60%，且检测周期缩短至4小时。特别在肺外结核诊断中，qPCR将尿液样本检出率从0%提升至30%，这对HIV高流行区具有重大意义。

研究同时揭示传统方法的局限性：培养法在体液样本中失败率高达97.5%，而qPCR仍能保持16%检出率。作者建议WHO将自建qPCR纳入低收入国家结核诊断指南，这对实现2035年终结结核病战略（End-TB Strategy）具有实践价值。值得注意的是，该方法可兼容现有PCR平台，无需专用设备，为全球特别是"一带一路"沿线高负担国家提供了技术平移范本。

（注：全文数据均来自原文，M.tb表示Mycobacterium tuberculosis，qPCR为quantitative PCR缩写，IS6110为结核分枝杆菌特异性多拷贝插入序列）