蟾衣抗类风湿性关节炎的分子机制：基于UPLC-Q-TOF/MS、网络药理学与实验验证的多维研究

本研究针对类风湿性关节炎（RA）治疗中药物毒副作用大的临床难题，通过UPLC-Q-TOF/MS技术鉴定蟾衣24种活性成分，结合网络药理学预测PI3K/AKT等关键通路，发现瑞西蟾毒配基（Resibufogenin）能显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子（TNF-α/IL-6/IL-1β）释放，并通过调控PI3K/AKT信号通路发挥抗RA作用，为传统中药现代化研究提供新思路。

　　

类风湿性关节炎（Rheumatoid Arthritis, RA）作为一种慢性自身免疫性疾病，全球发病率高达0.5-1.0%，其特征性关节破坏和全身性炎症反应给患者带来巨大痛苦。当前临床常用非甾体抗炎药和免疫抑制剂虽能缓解症状，但长期使用易导致胃肠道溃疡、骨质疏松等严重副作用。传统中药蟾衣（Toad clothing）在《神农本草经》中早有记载，具有解毒消肿、免疫调节等功效，但其抗RA的活性成分和作用机制始终未明。

针对这一科学问题，贵州医科大学的研究团队在《Scientific Reports》发表了一项突破性研究。他们创新性地采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF/MS）鉴定出蟾衣中24种化学成分（含17种甾体和7种脂肪酸），结合网络药理学筛选出PIK3CA、EGFR、JAK2等6个核心靶点，并通过分子对接证实瑞西蟾毒配基与这些靶点具有强结合力（结合能<-7 kcal·mol^-1）。体外实验进一步验证，该成分能剂量依赖性降低LPS诱导的RAW264.7细胞中TNF-α（降低74%）、IL-6（降低90%）和IL-1β（降低46%）水平，同时抑制PI3K/AKT通路关键蛋白磷酸化。

主要技术方法

研究团队通过UPLC-Q-TOF/MS完成成分鉴定，采用PharmMapper和SwissTargetPrediction预测药物靶点，结合GeneCards等数据库获取RA相关靶点，运用Cytoscape构建蛋白互作网络，通过AutoDock Vina进行分子对接验证，最后采用LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型完成实验验证。

研究结果

1. 1.

   蟾衣化学成分鉴定

   UPLC-Q-TOF/MS分析显示蟾衣甲醇提取物中含有24种活性成分，包括瑞西蟾毒配基（m/z 401.2321）、沙蟾毒精（m/z 387.2538）等。质谱碎片分析显示这些成分可通过中性丢失OH、H₂O等特征片段进行结构鉴定。

1. 1.

   核心靶点与通路预测

   PPI网络分析发现288个共同靶点，拓扑学筛选出PIK3CA、STAT3等8个核心靶点。KEGG富集显示PI3K-AKT通路最为显著（p<0.05），该通路中EGFR、JAK2等靶点与炎症反应密切相关。

2. 2.

   分子对接验证

   瑞西蟾毒配基与EGFR的结合能达-9.8 kcal·mol^-1，与PIK3CA形成氢键的关键氨基酸包括TRP-167和THR-163，证实其多靶点作用潜力。

3. 3.

   体外抗炎实验

   CCK-8检测表明瑞西蟾毒配基在2.5-80 μM浓度内无细胞毒性。80 μM剂量可显著抑制NO产生（p<0.01），并下调PIK3CA mRNA表达63%。Western blot证实该成分能抑制p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT蛋白表达。

结论与意义

该研究首次系统阐明蟾衣通过多成分-多靶点-多通路协同发挥抗RA作用的分子机制，其中瑞西蟾毒配基通过调控PI3K/AKT通路抑制炎症因子释放的发现尤为关键。相较于现有RA治疗药物，蟾衣衍生物具有多靶点、低毒性的独特优势，为开发新型抗RA中药制剂奠定理论基础。研究采用的"成分鉴定-网络预测-实验验证"研究范式，也为传统中药现代化研究提供了可借鉴的方法学框架。未来需进一步开展动物实验验证其体内药效，并完善蟾衣质量控制标准以推动临床应用。